正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選老鷹茶總皂苷的提取工藝研究

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1、正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選老鷹茶總皂苷的提取工藝研究作者：陸維麗李俊周維晨程文明湯文建【摘要】　　目的對(duì)從老鷹茶中提取總皂苷的工藝進(jìn)行優(yōu)化。方法以齊墩果酸為對(duì)照品，香草醛-高氯酸法顯色，用紫外分光光度法在550nm處測(cè)定總皂苷含量。采用L9正交設(shè)計(jì)，以老鷹茶總皂苷含量為考察指標(biāo)，考察乙醇濃度、提取時(shí)間、乙醇用量、提取次數(shù)4個(gè)因素對(duì)提取的影響。結(jié)果最佳提取工藝為80%乙醇，12倍量，回流提取3次，1h/次。結(jié)論該工藝經(jīng)實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，對(duì)進(jìn)一步的工藝開發(fā)有較好的參考價(jià)值?！娟P(guān)鍵詞】老鷹茶總皂苷正交實(shí)驗(yàn)紫外分光光度法老鷹茶系樟科木姜子屬毛豺皮樟LitseacoreanaLev

2、e的葉，俗稱“白茶”，分布于云南、貴州、四川、安徽等地。民間飲用表明老鷹茶具有解毒消腫、明目益思、生津止渴、解表防暑等功效，且無毒副作用，為藥食同源植物［1］，長(zhǎng)期飲用有益于健康。老鷹茶中含有黃酮、皂苷、有機(jī)酸、香豆素和鞣質(zhì)等成分，其中皂苷類成分含量豐富［2］。研究老鷹茶的化學(xué)成分，對(duì)研究天然產(chǎn)物化學(xué)多樣性，以及尋找新的藥用成分具有重要意義。為了有效開發(fā)和利用資源，本文采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)老鷹茶總皂苷的提取工藝進(jìn)行了研究。1儀器與試藥儀器722S分光光度計(jì)；8453紫外-可見分光光度計(jì)(Agilent)；電子天平BP211D(Sartorius)；GSY-8電熱

3、恒溫水浴鍋；EK-S5AB電熱真空干燥箱。試藥齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；老鷹茶，XX-05購(gòu)自安徽省寧國(guó)縣茶農(nóng)，陰干備用，經(jīng)植物學(xué)鑒定為樟科木姜子屬毛豺皮樟LitseacoreanaLeve的葉。試劑均為分析純，水為雙蒸餾水。方法與結(jié)果.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作［3］精密稱取經(jīng)120℃干燥至恒重的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品mg，置于2ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻，即得對(duì)照品溶液(每毫升含齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品)。精密量取對(duì)照品溶液，，，，，ml于10ml試管中，抽干甲醇，加%香草醛，高氯酸，搖勻于60℃水浴中加熱1min，冷卻，加冰醋酸ml，搖勻。以相應(yīng)試劑做空白，

4、在8453紫外-可見分光光度計(jì)上進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，最大吸收波長(zhǎng)為550nm。按分光光度法在550nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度值(Y)為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度(X)為橫坐標(biāo)繪圖，得回歸線性方程Y=，r=，線性范圍：～·L-1。.2提取溶劑的選擇.水提取法精密稱取老鷹茶g，加水50ml，在水浴上加熱回流提取1h，趁熱過濾，共提取2次，洗滌殘?jiān)?，合并濾液和洗滌液，蒸干溶劑。固體水溶后，正丁醇萃取，萃取液過氧化鋁柱，收集流出液，定容至200ml容量瓶中，搖勻，待用。.乙醇提取法精密稱取老鷹茶g，加80%乙醇50ml，在水浴上加熱回流提取1h，趁熱過濾，共提取2次，洗滌

5、殘?jiān)?，合并濾液和洗滌液，蒸干溶劑。固體水溶后，正丁醇萃取，萃取液過氧化鋁柱，收集流出液，定容至200ml容量瓶中，搖勻，待用。.樣品中總皂苷的含量測(cè)定精密量取供試品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法進(jìn)行操作，測(cè)定吸光度值，由回歸方程計(jì)算樣品中總皂苷的含量。結(jié)果見表1。表1提取溶劑與含量的關(guān)系.3正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果根據(jù)藥材性質(zhì)和生產(chǎn)實(shí)際要求，擬定影響浸出效果的4個(gè)主要因素，即A為乙醇濃度(%)，B為乙醇用量(倍體積)，C為提取時(shí)間(h/次），D為提取次數(shù)，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，編制因素水平表見表2。表2因素水平稱取適量老鷹茶干燥粗粉9份，按正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的工藝進(jìn)行提取，以老

6、鷹茶提取物中總皂苷含量為考核指標(biāo)，對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析見表3～4。表3正交試驗(yàn)(L934)直觀分析表4方差分析根據(jù)分析結(jié)果可知，各個(gè)因素對(duì)老鷹茶總皂苷提取效果的影響程度依次為A>D>C>B，且對(duì)提取效果影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素是因素A。綜合直觀分析和方差分析的結(jié)果，老鷹茶總皂苷理想的提取工藝方案是A3B3C1D3，即用12倍量的80%乙醇，回流提取3次，1h/次。.4提取工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步考察上述最佳工藝的穩(wěn)定性和合理性，按該工藝條件進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn)3次，分別測(cè)定老鷹茶總皂苷的含量。結(jié)果見表5。測(cè)定的結(jié)果均等于或優(yōu)于正交實(shí)驗(yàn)表中的任何一組，重復(fù)性好，

7、RSD=%(n=3)。說明該工藝穩(wěn)定可行。表5最佳工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)討論　　香草醛-高氯酸法顯色體系最大吸收波長(zhǎng)在550nm處，該顯色體系呈色穩(wěn)定，但由于老鷹茶粗提物中有色物質(zhì)的干擾，粗提物須經(jīng)過氧化鋁脫色。樣品脫色后顯色在近550nm處有最大吸收，因此該顯色體系可用于老鷹茶總皂苷含量測(cè)定?！　∮烧粚?shí)驗(yàn)的直觀分析和方差分析結(jié)果可知，從總皂苷這一指標(biāo)來看，因素A的影響最大，差異性最為顯著；老鷹茶總皂苷的最佳提取工藝為12倍量的80%乙醇，回流提取3次，1h/次。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出的工藝簡(jiǎn)單，操作容易，穩(wěn)定性好?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】　?。?］李延松.老鷹茶資源調(diào)查與開發(fā)利用［

8、J］.貴州茶葉,1995,4:10.　?。?］郁建平,古練權(quán).貴州