腎移植術(shù)后巨細(xì)胞病毒感染早期檢測方法

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1、腎移植術(shù)后巨細(xì)胞病毒感染早期檢測方法摘要】腎移植術(shù)后巨細(xì)胞病毒(CMV)感染具有較高的發(fā)病率和病死率，早期準(zhǔn)確的檢測有利于臨床治療，本文就CMV感染的檢測方法尤其是感染早期的幾種診斷方法進(jìn)行闡述?！娟P(guān)鍵詞】腎移植；巨細(xì)胞病毒；檢測方法巨細(xì)胞病毒(CMV)感染是腎移植術(shù)后的常見并發(fā)癥，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道CMV活動(dòng)性感染率在腎移植術(shù)患者中約50%～75%,有10%～30%的患者為有癥狀的CMV感染。一旦發(fā)生嚴(yán)重的CMV感染,特別是間質(zhì)性肺炎,病死率高達(dá)25%［1］。在移植術(shù)后,隨著各種免疫抑制劑的應(yīng)用,病毒將被激活。在腎移植受體中,CMV感染的臨床發(fā)病率與供體和受體移植前的血清學(xué)狀態(tài)以及所用

2、免疫抑制劑的種類和劑量有關(guān)。受體CMV陽性R+/供體CMV陰性D，為繼發(fā)性感染，癥狀較輕；如果由于供體腎及術(shù)后使用血液制品CMV陽性，即R/D+，為原發(fā)性感染,病情最為嚴(yán)重；若為重復(fù)感染,即R+/D+，病情較重［2］。有文獻(xiàn)報(bào)道術(shù)前供、受體CMV血清反應(yīng)均為陽性時(shí),術(shù)后患者發(fā)生臨床CMV感染的概率可達(dá)50%,供體陽性、受體陰性時(shí)術(shù)后CMV病的發(fā)生率近66%,因此而造成的CMV病、移植物喪失及醫(yī)療花費(fèi)都比其他因素的大［3］。急行排斥反應(yīng)和免疫抑制劑的使用是CMV感染最主要的誘發(fā)因素［4］,抗淋巴細(xì)胞球蛋白(ALG)，OKT3及細(xì)胞毒性藥物能直接促使?jié)摲牟《净罨?，而環(huán)孢素A、F

3、K06及糖皮質(zhì)激素能夠抑制機(jī)體的免疫系統(tǒng),導(dǎo)致病毒感染的播散與遷延,進(jìn)一步加重病情，其中多克隆或單克隆抗淋巴細(xì)胞抗體刺激CMV感染的效應(yīng)最強(qiáng),成為影響移植術(shù)后CMV感染發(fā)生的重要因素。因此早期診斷和及時(shí)預(yù)防性抗病毒治療是降低移植術(shù)后CMV病發(fā)病率和病死率的關(guān)鍵。CMV感染的癥狀常表現(xiàn)為不明原因的發(fā)熱，伴有白細(xì)胞減少或淋巴細(xì)胞增多、血小板減少、肌肉痛、關(guān)節(jié)痛和胃納差等，當(dāng)發(fā)展為CMV病時(shí)，常引起間質(zhì)性肺炎，表現(xiàn)為干咳和呼吸困難，嚴(yán)重者可發(fā)生急性呼吸衰竭。此外，還可引起腦炎、肝炎、胃腸炎、急性視網(wǎng)膜炎、消化道潰瘍等?！?CMV感染的檢測方法一般檢查外周血白細(xì)胞減少或淋巴細(xì)胞增多，血小

4、板減少；尿常規(guī)可發(fā)現(xiàn)蛋白尿，并有少量紅細(xì)胞、白細(xì)胞，可有ALT和膽紅素升高，肺部X線檢查：雙下肺炎癥改變。組織學(xué)檢查病毒分離培養(yǎng)，取尿、血、咽拭子、支氣管肺泡灌洗液及組織標(biāo)本直接培養(yǎng)，病毒培養(yǎng)敏感性低，耗時(shí)常需要3周～6周時(shí)間出結(jié)果，不利于指導(dǎo)臨床用藥。組織學(xué)檢查找巨形細(xì)胞,一般在嚴(yán)重原發(fā)性感染時(shí)更有意義。血清學(xué)檢查包括CMV抗體檢查，CMV抗原血癥測定法，CMV多聚酶鏈測定法和PP7mRNA的監(jiān)測。現(xiàn)就血清學(xué)檢查的具體方法介紹如下。CMV抗體檢查采用ELISA法測定血清中CMVIgM、IgG?？笴MV抗體血清學(xué)檢查方法簡單，但CMVIgM在原發(fā)性感染早期不出現(xiàn)，CMVIg

5、G在繼發(fā)性感染中需升高4倍才有意義。由于腎移植患者術(shù)后常規(guī)使用免疫抑制劑，CMV抗體產(chǎn)生常延遲或缺乏，影響陽性檢出率。一般用于監(jiān)測移植前供、患者的CMV攜帶狀況。CMV抗原血癥測定法機(jī)體感染CMV后可在外周血白細(xì)胞中檢測到CMV抗原，成為CMV抗原血癥,CMV抗原血癥的出現(xiàn)明顯早于臨床癥狀的出現(xiàn)和血清學(xué)的改變。CMVPP5抗原檢測可以早期診斷CMV感染，已成為國際公認(rèn)的監(jiān)測HCMV活動(dòng)性感染的“標(biāo)準(zhǔn)方法”之一［6］。CMVPP5抗原是CMVUL3基因編碼的早期即刻蛋白(IEA)，在CMVDNA復(fù)制前就有合成，對CMV的復(fù)制具有調(diào)控作用,是體內(nèi)早期活動(dòng)性CMV病毒復(fù)制的標(biāo)志

6、［6，7］。CMV抗原血癥測定法計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞，根據(jù)已制定的參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)來決定是否采取抗病毒治療。通常通過免疫組織化學(xué)染色法(即標(biāo)記鏈絲菌素生物素結(jié)合法，LSAB法)檢測外周血白細(xì)胞CMV抗原，該方法可以避免用ABC法導(dǎo)致內(nèi)源性過氧化物酶的非特異性染色而呈現(xiàn)假陽性的結(jié)果，而且用普通顯微鏡即可作出診斷。在普通光學(xué)顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)5萬個(gè)白細(xì)胞中CMV陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)(稱抗原指數(shù))。陽性細(xì)胞在鏡下細(xì)胞核為黃色或棕黃色，陰性細(xì)胞核為藍(lán)色或藍(lán)紫色。測定CMVPP5抗原敏感性及特異性均高，達(dá)90％以上，但是CMV抗原血癥測定法的缺點(diǎn)是需要新鮮血標(biāo)本(標(biāo)本必須在h內(nèi)及時(shí)處理),來獲得最佳敏感性，否

7、則PP5陽性細(xì)胞數(shù)將會(huì)減少,試驗(yàn)的敏感性將會(huì)降低。CMV多聚酶鏈測定法用多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)來擴(kuò)增DNA被證實(shí)是檢查臨床標(biāo)本CMV感染的可靠方法。通常有定性PCR技術(shù)和定量PCR技術(shù)。定性PCR定性PCR主要檢測外周血白細(xì)胞CMV的磷酸化蛋白PP1基因序列,要嚴(yán)格按照PCR診斷試劑盒操作說明書進(jìn)行操作。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，CMV激活性感染和潛伏性感染患者的單個(gè)核細(xì)胞中存在著低水平的CMVDNA，該方法不能區(qū)分CMV活動(dòng)性感染和潛伏性感染,因此對于臨床監(jiān)測CMV感染有一定的局限性［8