毒熱平注射液抗流感病毒作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究

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1、毒熱平注射液抗流感病毒作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究作者：張艷麗，顧立剛，范新生，李澎濤【摘要】目的：觀察毒熱平注射液對(duì)流感病毒感染小鼠的死亡保護(hù)作用和對(duì)小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用。方法:用流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠，建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型，觀察肺指數(shù)、病毒致小鼠病死率。結(jié)果：毒熱平注射液的大、中劑量組對(duì)小鼠流感病毒性肺炎有抑制作用，對(duì)流感病毒感染小鼠具明顯的死亡保護(hù)作用。結(jié)論：毒熱平注射液在小鼠體內(nèi)具有效的抗流感病毒作用?！娟P(guān)鍵詞】毒熱平;流感病毒;肺炎模型中醫(yī)學(xué)稱流感為“時(shí)行感冒”或“重傷風(fēng)”，其不同于普通感冒，是由時(shí)邪病毒引起的一種外感熱病，無季節(jié)性和

2、地域性，具有傳染性和流行性。流感病毒抗原的易變性使疫苗難以達(dá)到理想預(yù)防效果［1］;化學(xué)藥物因其特異性不強(qiáng)，副作用明顯，性價(jià)比低下等特點(diǎn)而難以廣泛應(yīng)用。在此我們開展了新藥毒熱平注射液的抗流感病毒實(shí)驗(yàn)研究，為該藥的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)，拓寬祖國(guó)醫(yī)藥的開發(fā)和使用前景。1實(shí)驗(yàn)材料病毒流感病毒亞甲型鼠肺適應(yīng)株(FM1)，中國(guó)中醫(yī)藥研究院中醫(yī)所提供，本實(shí)驗(yàn)室-76℃保存?zhèn)溆?。?日齡雞胚尿囊腔連續(xù)傳代2次后，測(cè)血凝滴度為1：512。動(dòng)物ICR小鼠，體重14g±1g，合格證號(hào)：SLXK(京XXXX)，級(jí)別:SPF/VAF。小鼠及飼料均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)中心提供。飼養(yǎng)環(huán)境：本室動(dòng)物室動(dòng)物潔凈柜，室溫：(2

3、2±2)℃，相對(duì)濕度：50%±10%。藥物毒熱平注射液，棕色液體，174mg/10ml；陽性對(duì)照藥：注射用雙黃連(凍干粉)：600mg干粉/支，實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水配制成40mg/ml備用，批號(hào):0501004(哈藥集團(tuán)中藥二廠)；利巴韋林：100mg/ml，批號(hào)：0506251(石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司)。方法和結(jié)果.1流感病毒對(duì)小鼠半數(shù)致死量(LD50)的測(cè)定取ICR小鼠50只,用單純隨機(jī)抽樣法隨機(jī)平均分成5組,病毒為(2-6-2-10)/mL5個(gè)稀釋度，每只小鼠經(jīng)乙醚輕度麻醉后分別滴鼻感染不同稀釋度病毒液，以死亡和生存為觀察指標(biāo)，24h內(nèi)死亡的不予統(tǒng)計(jì)。每天觀察,直至感染后第14d為止

4、。按ReedMunch公式［2］計(jì)算出病毒的半數(shù)致死量(LD50)為/mL。.2對(duì)流感病毒所致小鼠死亡的保護(hù)作用［3］取ICR小鼠140只,隨機(jī)分組、給藥見表1。將各組小鼠用乙醚輕度麻醉，正常對(duì)照組以生理鹽水滴鼻，其余各組以4個(gè)LD50流感病毒液滴鼻感染，每只，于感染當(dāng)天開始腹腔給藥，對(duì)照組在同等條件下注射生理鹽水，每天1次，連續(xù)10d。從感染之日算起，連續(xù)觀察15d,每天觀察小鼠發(fā)病癥狀并記錄小鼠感染病毒后的死亡數(shù)和死亡時(shí)間，按以下公式計(jì)算出死亡保護(hù)率和延長(zhǎng)生命率，結(jié)果采用組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(見表1)?！≌＝M小鼠飲食正常，精神良好，毛發(fā)光澤，體重自然增加；模型組小鼠自感染后第

5、4d開始出現(xiàn)呼吸急促、抱團(tuán)蜷縮、毛發(fā)澀亂，體重下降；第6d開始出現(xiàn)死亡,12d后基本不死亡了。利巴韋林對(duì)照組小鼠感染后第6d僅出現(xiàn)輕微的畏寒無力、呼吸急促癥狀，第8d后癥狀基本消失。雙黃連組第6d開始出現(xiàn)死亡,第10d停止死亡，但死亡數(shù)較模型組少。毒熱平注射液各組，感染后第6d開始出現(xiàn)蜷縮畏寒癥狀，體重明顯下降，開始出現(xiàn)死亡,第10d狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)，活動(dòng)增加，體重逐日恢復(fù)但較利巴韋林組低。表1毒熱平注射液對(duì)流感病毒致小鼠死亡的保護(hù)作用組注：與模型組比較，△P.3對(duì)流感病毒所致小鼠肺炎的抑制作用［3］取ICR小鼠70只，隨機(jī)分組、給藥見表2。將各組小鼠用乙醚輕度麻醉，正常對(duì)照組以生理鹽水滴鼻

6、，其余各組以40個(gè)LD50流感病毒液滴鼻感染,每只，于感染后第2d開始腹腔給藥，對(duì)照組在同等條件下注射生理鹽水,每日1次，連續(xù)6d，第7d摘眼球放血處死，稱體重后解剖，肉眼觀察肺部病變，摘取全肺稱重，逐個(gè)計(jì)算肺指數(shù)及抑制率，結(jié)果采用組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(見表2)。肺指數(shù)=小鼠肺重(g)小鼠體重(g)×100%肺指數(shù)抑制率%=病毒對(duì)照組肺指數(shù)均值-實(shí)驗(yàn)組肺指數(shù)均值病毒對(duì)照組肺指數(shù)均值×100%表2毒熱平注射液對(duì)小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用組別劑量(g/kg·d)動(dòng)物數(shù)(只)肺指數(shù)注：與模型組比較,△P　從上表結(jié)果可看出，毒熱平注射液對(duì)小鼠流感病毒性肺炎有抑制作用，與模型組比較，大、中、

7、小劑量組結(jié)果都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P討論　流感病毒即中醫(yī)所謂的外來邪毒，呼吸系統(tǒng)是其侵襲的靶系統(tǒng)，“溫邪上受，首先犯肺”?？梢鹁植亢腿淼难装Y反應(yīng)，熱毒煉血為瘀，氣不行血亦成瘀，瘀血致氣機(jī)阻滯，妨邪外達(dá)。毒熱平注射液是由黃芩、梔子等藥物制成的中藥復(fù)方注射劑，具有清熱解毒、涼血通絡(luò)之功效［4、5］?！”緦?shí)驗(yàn)我們采用了小鼠流感病毒肺炎的生物模型，結(jié)果表明毒熱平注射液各劑量組都能不同程度降低肺指數(shù)，且呈正量效關(guān)系，對(duì)小鼠病毒性肺炎的發(fā)生具有明