草珊瑚離體不定叢芽誘導因子篩選的研究

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1、草珊瑚離體不定叢芽誘導因子篩選的研究作者：潘見歡潘超美陳良堅黃崇才賴珍珍【摘要】【目的】　探討影響草珊瑚不定芽誘導的培養(yǎng)因素，為建立草珊瑚初代離體培養(yǎng)體系提供依據(jù)?！痉椒ā恳圆萆汉飨屡咻S誘導獲得的無菌再生苗莖段為外植體，考察6芐氨基嘌呤(6BA)和吲哚丁酸(IBA)不同濃度配比、光照時間和強度以及溫度對草珊瑚離體不定芽高頻誘導的影響?！窘Y(jié)果】6BA和IBA組合能有效提高草珊瑚不定芽的誘導率，而高濃度的植物激素會抑制草珊瑚不定芽的生長;草珊瑚在散射光或弱直射光照射下生長勢頭好，暗培養(yǎng)或過強直射光會出現(xiàn)植株發(fā)黃、皺縮

2、、甚至死亡的現(xiàn)象;在溫度為25℃時，草珊瑚不定芽誘導率達到100%，低于25℃或高于30℃均不利于其生長?！窘Y(jié)論】以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加25mg/LBA+01mg/LIBA，溫度為25℃，采用柔弱自然散射光或低于2000lx直射光照射，時間少于8h能有效促進草珊瑚離體不定芽的誘導，誘導率達8298%。【關(guān)鍵詞】草珊瑚/生長和發(fā)育;　不定叢芽;　培養(yǎng)基，條件性草珊瑚Sarcandraglabra(Thumb)Nakai，屬金粟蘭科Chloranthaceae草珊瑚屬Sa

3、rcandra，又叫九節(jié)茶、腫節(jié)風、接骨木，為多年生草本或亞灌木。草珊瑚具消炎、清熱、解毒和舒筋活血作用，臨床用于治療多種炎癥。最新研究發(fā)現(xiàn)草珊瑚對腫瘤，尤其是急性白血病有一定治療效果[1]。近年來草珊瑚已被開發(fā)成一系列藥品和日用品，如草珊瑚口服液[2]、草珊瑚清口香[3]和草珊瑚注射液[4]等。隨著開發(fā)利用的不斷擴展，忽視了對其資源的保護，致使野生資源遭受毀滅性的破壞，因此挽救草珊瑚種質(zhì)資源的研究勢在必行。目前對草珊瑚的研究主要集中在常規(guī)栽培、藥材的組織鑒別以及化學成分組成的分析上，在離體快速

4、繁殖方面的研究甚少。本文在建立草珊瑚離體快速繁殖培養(yǎng)體系研究的基礎(chǔ)上，對草珊瑚的離體叢芽誘導培養(yǎng)進行了多方面考察，旨在為腫節(jié)風藥材生產(chǎn)的源頭——草珊瑚優(yōu)質(zhì)種苗(試管苗)繁育的規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。現(xiàn)報道如下。　1　材料與方法11　藥材　試驗藥材采自廣州帽峰山野生草珊瑚，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學藥用植物學教研室潘超美教授鑒定，確認為金粟蘭科植物草珊瑚Sarcandraglabra(Thumb)Nakai。取其種子，經(jīng)消毒后在無菌條件下誘導萌發(fā)，切取胚和下胚軸誘導獲得無菌叢芽和再生植株，以無菌再生苗的莖段作為誘導不

5、定芽的材料(圖1)。12　主要儀器與試劑　6芐氨基嘌呤(6BA)由上海求精生化試劑儀器有限公司生產(chǎn)(批號：XX0718);吲哚丁酸(IBA)由上海求精生化試劑儀器有限公司生產(chǎn)(批號：XX0310);瓊脂粉由湛江新臺興海洋生物制品有限公司生產(chǎn)(批號：XX818);其他試劑均為化學純;DLCJ1F型單人雙面超凈工作臺由哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)有限公司提供;YXQSGD型全自動高壓滅菌鍋由廣東醫(yī)療器械廠提供;XS125A型電子分析天平由瑞士Sartorius公司提供。LRH300G型生物光照培養(yǎng)箱由廣東醫(yī)療器械廠提供。

6、表1　叢芽誘導培養(yǎng)基的L16(45)正交試驗設(shè)計13　多種影響因子的篩選[5]　采用MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基按照常規(guī)方法，根據(jù)表1正交試驗設(shè)計的不同配方配制，添加30g/L的蔗糖、6g/L瓊脂粉，pH58～60，121℃～124℃(11kg/cm2壓力)滅菌15min。在無菌條件下，將草珊瑚無菌再生苗切成1～15cm長帶節(jié)莖段，接種于培養(yǎng)基中，每瓶3～4個。培養(yǎng)溫度(25±2)℃，光照用日光燈1800～2200lx，每天連續(xù)光照8h。28d后統(tǒng)計不定芽誘導率

7、及不定芽的增殖率。　2　結(jié)果與分析1　不同激素配比對草珊瑚叢芽誘導的影響　從表2結(jié)果可知，處理10和處理14均能獲得較高的不定芽誘導率，即3mg/L6BA+01mg/LIBA和25mg/L6BA+01mg/LIBA的組合，在此激素組合水平下，草珊瑚不定芽生長迅速，較粗壯，說明草珊瑚不定芽誘導階段要求有較高的外源激素水平。但高含量的細胞分裂素(處理13~16)會在不定芽形成后，芽的基部膨大導致材料愈傷化。故不定芽誘導中以處理10組合較為合適。在兩種激素的試驗處理中，單獨使用6BA的量達3

8、mg/L(處理13)時，不定芽誘導率可提高到7368%，不定芽萌動時間提早，接種后15d左右就會看到莖節(jié)處長出不定叢芽，但芽體較纖弱。圖2結(jié)果顯示，雖然6BA、IBA和誘導率之間無明顯線性關(guān)系，但在IBA濃度較低(IBA=0、01mg/L)時，隨著6BA濃度的增加，誘導率基本呈現(xiàn)增加的趨勢，當6BA