結(jié)球甘藍離體葉片不定芽的再生研究.pdf

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1、■澎江右J-：學(xué)2014年第1期文獻著錄格式：黃小云，陶鵬，王五宏，等．結(jié)球甘藍離體葉片不定芽的再生研究[J]．浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014(1)：34—38結(jié)球甘藍離體葉片不定芽的再生研究黃小云一，陶鵬，王五宏。，李必元，岳智臣，雷娟利，鐘新民(1．浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所，浙江杭州310021；2．南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，江蘇南京210095)摘要：以結(jié)球甘藍強力50組培苗葉片為外植體，研究不同激素配比、苗齡對其不定芽再生的影響。結(jié)果表明，在不含任何激素以及單獨添加不同濃度的6-BA或NAA的MS培養(yǎng)基上，均不能誘導(dǎo)

2、外植體不定芽的分化；結(jié)球甘藍離體葉片不定芽在Ms+6一BA2mg·L～+NAA0．80mg·L分化培養(yǎng)基上再生頻率最高，為79．86％，最適宜的苗齡為8d；外植體在生根培養(yǎng)基1／2MS+0．30mg·LNAA中，不定芽的生根效果好，生根率達100．0％，且根系生長健壯。關(guān)鍵詞：結(jié)球甘藍；不同激素配比；葉片；離體培養(yǎng)中圖分類號：S635．1文獻標志碼：A文章編號：0528．9017(2014)014)034—04結(jié)球甘藍(BrassicaoleraceaL．vat．capitata1．2方法L．)是十字花科蕓薹屬植物

3、，是我國重要的蔬菜1．2．1無菌苗培養(yǎng)作物之一。近年來采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將目的基因?qū)脒x取籽粒飽滿、大小均一的甘藍種子，用清水結(jié)球甘藍，已成為培育抗逆新品種的一種新手段，沖洗干凈，置于75％的酒精中浸泡30s，用0．1％而建立穩(wěn)定可靠的高效離體再生體系是利用基因工的HgC1，表面消毒5min，最后用無菌水沖洗4次，程和其他技術(shù)育種的基礎(chǔ)。在結(jié)球甘藍離體培養(yǎng)研再用滅菌濾紙吸去種子表面的水分，接種于無激素究中，以下胚軸作為外植體的研究最多¨，且獲的MS基本培養(yǎng)基(蔗糖30g·L+瓊脂9g·得高效高頻再生體系。葉綠體轉(zhuǎn)基因植

4、物作為一種L～，pH值5．8)上。于(25±2)℃、光照強度新型生物反應(yīng)器，具有外源蛋白表達量高和環(huán)境安1800lx，16h光／8h暗的光周期條件下培養(yǎng)無全性好等優(yōu)點71，而葉片作為葉綠體轉(zhuǎn)基因植物菌苗。最理想的外植體，研究其離體再生具有重要意義。1．2．2不同激素組合試驗本試驗以結(jié)球甘藍強力50(簡稱QL50)為材料，試驗2種激素的不同組合，6．芐氨基腺嘌呤研究了不同激素配比、苗齡對離體子葉不定芽再生(6-BA)濃度為0，1，2，3，4mg·L～，萘乙酸的影響，以期建立高效的植株再生體系，為今后通(NAA)濃度為

5、0，0．02，0．04，0．20，0．40，過葉綠體基因組遺傳轉(zhuǎn)化獲取預(yù)期優(yōu)良性狀的結(jié)球0．80mg·L一，進行完全隨機組合。在材料苗長約甘藍創(chuàng)造條件，并為進一步有效地開展結(jié)球甘藍葉7cm，切取0．3cm×0．3cm的葉片放入加有不同綠體基因工程的研究奠定基礎(chǔ)?，F(xiàn)將有關(guān)結(jié)果報道激素組合的MS分化培養(yǎng)基中。用培養(yǎng)皿進行培如下。養(yǎng)，每皿接種30個外植體，重復(fù)3次。培養(yǎng)20d，觀察不定芽的分化情況，30d后統(tǒng)計出芽情況。1材料與方法1．2．3苗齡試驗1．1材料在篩選出來的出芽較好的培養(yǎng)基上，取7，8，供試材料為結(jié)球甘藍Q

6、L50，由浙江省農(nóng)業(yè)科9，10，11，12d苗齡的外植體接種。培養(yǎng)30—學(xué)院蔬菜研究所提供，取其無菌實生苗葉片為外35d，統(tǒng)計不定芽分化率。植體。t．2．4不定芽生根與植株移栽收稿日期：2013-08．22基金項目：浙江省農(nóng)業(yè)新品種選育重大科技專項(2012C12903-6—2)；浙江省博士后科研項目(Bsh1202084)；浙江省蔬菜產(chǎn)業(yè)科技創(chuàng)新團隊項目(2009R50026)作者簡介：黃小云(1989一)，女，湖北孝感人，碩士，主要從事蔬菜作物遺傳育種研究工作。E-mail：yunxiaohuangl107@1

7、26．corn。通信作者：鐘新民，E·mail：zxmlly@hotmail．com。黃小云，等：結(jié)球甘藍離體葉片不定芽的再生研究_■當(dāng)分化培養(yǎng)基中的不定芽長到1．5～2．5crtl其中3mg·L6-BA膨大最弱，但是處理10和處理時，切取后接種至含不同濃度生長素的生根培養(yǎng)基15即在6·BA濃度為1，2mg·L的處理比濃度為(1／2MS+0．30mg·LNAA，1／2MS+0．50mg·3mg·L的稍弱；接種20d后，處理10和處理l5LNAA)上直接誘導(dǎo)生根。待芽基部形成大量的已開始出芽，大部分不定芽于接種后30

8、～35d產(chǎn)毛根后，打開培養(yǎng)瓶口，煉苗4—5d后取出小植生，接種45d后仍有少數(shù)不定芽的產(chǎn)生。由表1中株，洗凈根部，移栽到基質(zhì)中，一周后觀察其成活可知，在MS培養(yǎng)基上單獨添加6一BA或NAA任何率和生長狀況。一種物質(zhì)，甘藍葉片均不能再生出不定芽，在不添1．3不定芽再生頻率與生根率的計算加任何激素的MS培養(yǎng)基上，也不能再生不定芽，不定芽再生頻率／％=(再生不定芽