腸道病毒感染病例標(biāo)本的處理細(xì)胞接種和觀察PPT課件

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1、腸道病毒感染病例標(biāo)本的處理、細(xì)胞接種和觀察1人腸道病毒簡介和分類?小核糖核酸病毒科（Picornaviridae）的成員，主要在腸道內(nèi)復(fù)制,但可感染各個系統(tǒng)和器官。?單正鏈的無包膜RNA病毒，RNA有感染性。?小球形病毒（~30nm），20面體對稱結(jié)構(gòu)。?衣殼有VP1-VP4四種蛋白，VP1-VP3分布在表面，VP4與內(nèi)部RNA結(jié)合。?與鼻病毒不同的是，它們在酸性環(huán)境中穩(wěn)定。?在胞漿增殖，有明顯CPE，破胞釋放。?引起多種疾?。郝楸孕约膊　o菌性腦膜炎、心肌損傷、手足口病，結(jié)膜炎，皮疹等。2電鏡下的病

2、毒形態(tài)34病毒特性腸道病毒適合在濕、熱的環(huán)境下生存與傳播，對乙醚、去氯膽酸鹽等不敏感，75%酒精和5%來蘇亦不能將其滅活，但對紫外線及干燥敏感。各種氧化劑(高錳酸鉀、漂白粉等)、甲醛、碘酒都能滅活病毒。病毒在50℃可被迅速滅活，但1mol濃度二價陽離子環(huán)境可提高病毒對熱滅活的抵抗力，病毒在4℃可存活1年，在-20℃可長期保存，在外環(huán)境中病毒可長期存活。5人腸道病毒傳播方式>糞-口途徑傳播:唾液與糞便>呼吸道傳播:空氣飛沫>接觸傳播:一般人腸道病毒在呼吸道飛沫中可存留約一至三周，而經(jīng)胃腸道的糞便排泄可達(dá)

3、到二至三個月以上。6病毒的組織培養(yǎng)所有已知的人腸道病毒都可以在組織細(xì)胞培養(yǎng)或乳鼠中繁殖；大部分血清型可以在1種以上的人源傳代細(xì)胞中生長；但是沒有哪一種細(xì)胞可以支持所有的人腸道病毒生長；研究至今，一些血清型（如CoxA1病毒）只能在乳鼠中繁殖。7實(shí)驗(yàn)室檢測方法臨床懷疑：夏秋季，嬰幼兒、皮疹、接觸、腦膜炎實(shí)驗(yàn)室的檢測方法包括：1)血清抗體的變化：血清抗體4倍變化2)病毒培養(yǎng)及鑒定：理想（金標(biāo)準(zhǔn)）但費(fèi)時費(fèi)力，且部分腸病毒型別不易培養(yǎng)3)組織病理切片檢查4)分子生物學(xué)檢測，RT-PCR，RealTimePCR

4、，分子雜交等5)快速抗原檢測：芯片8病毒分離–診斷腸道病毒感染的最主要手段，也是金標(biāo)準(zhǔn)。–柯薩奇B組病毒和?？刹《究梢院苋菀椎卦诩?xì)胞培養(yǎng)上生長。適合的標(biāo)本有咽拭子、糞便標(biāo)本，鼻拭子等，也可以從腦脊液中分離到病毒。–一些柯薩奇A組病毒不容易通過細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行分離，可以通過乳鼠進(jìn)行分離，但是操作比較復(fù)雜，一般實(shí)驗(yàn)室不常規(guī)使用這種方法。分子生物學(xué)的方法更適合這種病毒的診斷。?血清學(xué)方法–自從細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)可以用做病毒分離后，血清學(xué)方法已經(jīng)不經(jīng)常使用了。–中和實(shí)驗(yàn)，但是非常繁瑣，因此，一般也不做這方面的實(shí)驗(yàn)。9細(xì)

5、胞培養(yǎng)分離方法?1990年以前，大都都采用Vero、GMK細(xì)胞分離；?1994年以后，人結(jié)腸癌上皮細(xì)胞（Caco-2）取代了Vero細(xì)胞；?1998年人們開始用人肺系細(xì)胞（MRC-5）分離CoxA16等毒株，其敏感性與Caco-2細(xì)胞相當(dāng)。?目前，大都使用人源細(xì)胞如人喉癌上皮細(xì)胞（HEp-2）、人橫紋肌肉瘤細(xì)胞（RD）用于病毒分離。RD細(xì)胞支持大多數(shù)柯薩奇A組病毒復(fù)制。?對一些不能在細(xì)胞上生長的病毒，可用乳鼠接種分離病毒。但埃可病毒一般不引起乳鼠發(fā)病。10標(biāo)本的采集（一）糞便標(biāo)本：采集病人發(fā)病7日內(nèi)的

6、糞便標(biāo)本，用于病原檢測。糞便標(biāo)本采集量5~8g/份，采集后立即放入無菌采便管內(nèi)，4℃暫存立即(12h內(nèi))送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標(biāo)本存于－70℃冰箱。（二）咽拭子標(biāo)本：采集病人發(fā)病3日內(nèi)的咽拭子標(biāo)本，用于病原檢測。用專用采樣棉簽，適度用力拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位，應(yīng)避免觸及舌部；迅速將棉簽放入裝有3~5ml保存液（維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，以防干燥。4℃暫存立即（12h內(nèi)）送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長

7、期保存的標(biāo)本存于－70℃冰箱。（三）血清標(biāo)本：采集急性期（發(fā)病0~3d）和恢復(fù)期（發(fā)病14~30d）雙份配對血清用于抗體檢測。靜脈采集3~5ml全血，置于真空無菌采血管中，自凝后，分離血清，將血清置于－20℃以下冰箱中冷凍保存。11（四）皰疹液：在手足口病的實(shí)驗(yàn)室診斷中，從皰疹液中分離到病毒具有很高的診斷價值，可同時采集多個皰疹作為一份標(biāo)本。先用75%的酒精對皰疹周圍的皮膚進(jìn)行消毒，然后用消毒針將皰疹挑破用棉簽蘸取皰疹液，迅速將棉簽放入內(nèi)裝有3~5ml保存液（維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的采樣管

8、中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封。所采集標(biāo)本4℃暫存立即（12h內(nèi)）送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標(biāo)本存于－70℃冰箱。（五）腦脊液標(biāo)本：出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的病例，要采集腦脊液標(biāo)本，進(jìn)行病原和抗體檢測，從腦脊液中分離病毒也具有很高的診斷價值。采集時間為出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀后3天內(nèi)，采集量為1.0~2.0ml。采集后立即裝入無菌帶墊圈的凍存管中，4℃暫存立即(12h內(nèi))送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標(biāo)本存于－70