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《反相高效液相色譜法測定三七花中人參皂苷rb1的含量》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、反相高效液相色譜法測定三七花中人參皂苷Rb1的含量【關(guān)鍵詞】三七花人參皂苷Rb1反相高效液相色譜法 Abstract:ObjectiveTogivethefoundationofqualitystandardofNotoginsengbud.MethodsRP-HPLCineRb1ofNotoginsengbud.ResultsThestabilitytimeethodethodaccordsent.ItcanbeusedindeterminingthecontentofRb1inNotoginsengbud. KeyC18100A5μm250mm×4.
2、6mm;試劑均為色譜純。人參皂苷Rb1對照品(中國藥品生物制品檢定所,供含量測定用)。 2方法與結(jié)果 2.1色譜條件色譜柱AlltechPlatinumC18100A5μm250mm×4.6mm;流動相為乙腈-水(30∶70);檢測波長為203nm。色譜圖見圖1~2。 2.2供試品制備條件的考察 2.2.1甲醇回流時間的考察考察了甲醇回流時間對人參皂苷Rb1提取的影響。結(jié)果見表1。依據(jù)結(jié)果,確定甲醇提取時間為4h。表1不同甲醇提取時間對含量測定的影響(略) 2.2.2石油醚提取次數(shù)考察樣品用甲醇提取后,提取液用石油醚(30~60℃)萃取除雜,10m
3、l/次,考察不同提取次數(shù)對人參皂苷Rb1提取的影響。結(jié)果見表2。依據(jù)結(jié)果,為縮短樣品處理時間,確定石油醚提取次數(shù)為2次?! ?.2.580%乙醇洗脫用量及收集洗脫液量的考察考察不同80%乙醇洗脫用量及收集洗脫液量對人參皂苷Rb1提取的影響。結(jié)果見表5。依據(jù)結(jié)果,確定80%乙醇洗脫用量為80ml,收集洗脫液70ml。表5不同80%乙醇洗脫用量及收集洗脫液量的比較(略) 2.3供試品溶液的制備取三七花藥材粉末(過3號篩)10g,精密稱定0.2g,置索氏提取器中,加氯仿60ml,加熱回流1h,棄去氯仿液,藥析揮去氯仿,加甲醇55ml,加熱回流4h,提取液揮干,加
4、水10ml溶解,加石油醚(30~60℃)提取2次,10ml/次,棄取醚液,水液通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm,長15cm),以水70ml洗脫,棄去水液,再用20%乙醇50ml洗脫,棄去20%乙醇洗脫液,繼用80%乙醇80ml洗脫,收集洗脫液70ml,蒸干,殘渣加甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得。 2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立取人參皂苷Rb1對照品約11mg,精密稱定,用甲醇定容至10ml容量瓶中,配制成濃度為1.16mg·ml-1的對照品溶液。用甲醇逐級稀釋成一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。按上述色譜條件進(jìn)樣HPLC分析,以峰面積(A
5、)對含量(Y)進(jìn)行線性回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=0.0046A+0.1129r=0.9999,線性范圍為0.58~11.6μg?! ?.5精密度實驗取同一人參皂苷Rb1對照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,精密度為0.55%?! ?.6穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液,于0,2,4,6,8h分別進(jìn)樣,精密度為0.83%?! ?.7重復(fù)性實驗取相同制法制備的同一批次5份樣品進(jìn)行測定,結(jié)果RSD為4.12%,表明重復(fù)性良好?! ?.8回收率實驗于三七花粉末中加入適量人參皂苷Rb1對照品標(biāo)準(zhǔn)液形成高、中、低3個濃度的樣品,按“2.3”處理后進(jìn)行HPLC分析,計算人參皂苷Rb1的
6、方法回收率,得回收率分別為102.88%,97.87%,103.57%。結(jié)果見表6。表6回收率實驗結(jié)果(略) 2.9三七花藥材含量測定取三七花藥材粉末10g,精密稱定0.2g,按上述測定方法進(jìn)行HPLC測定。結(jié)果見表7。表7三七花藥材含量測定結(jié)果(略) 3討論 本文曾以三七塊根研究中常用的人參皂苷Rg1作為測定指標(biāo)建立含量測定方法,但在實驗中發(fā)現(xiàn)三七花中Rg1含量遠(yuǎn)少于Rb1,以其作為測定指標(biāo)有所不妥,與文獻(xiàn)報道相符?! ∮捎谌呋ㄖ兴M分較多,包括黃酮類、揮發(fā)油類、多糖類、氨基酸類等,且含有塊根所沒有的大量葉綠素,極易對測定造成干擾,故在供試品制備
7、中選用D101型大孔吸附樹脂,先用水洗去多糖,再用20%乙醇洗去黃酮類物質(zhì),最后收集80%乙醇洗脫液,結(jié)果表明可起到較好的純化作用?! 难芯拷Y(jié)果看,云南文山的三七花總皂苷含量高于廣西靖西,表明不同產(chǎn)地的藥材有一定差異,選材時必須加以考慮。【參考文獻(xiàn)】 ?。?]劉剛,鮑建材,鄭友蘭,等.三七化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].人參研究,2004,2:10. [2]田國才.三七花治療心律失常的探討[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志,2000,44:147. ?。?]周迎春,趙懷清,梁寧,等.高效液相色譜法同時測定三七總皂苷中人參皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1含量[J]
8、.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2003,20(1):27.