反相高效液相色譜法測定三七花中人參皂苷rb1的含量

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1、反相高效液相色譜法測定三七花中人參皂苷Rb1的含量【關(guān)鍵詞】三七花人參皂苷Rb1反相高效液相色譜法　　Abstract：ObjectiveTogivethefoundationofqualitystandardofNotoginsengbud.MethodsRP-HPLCineRb1ofNotoginsengbud.ResultsThestabilitytimeethodethodaccordsent.ItcanbeusedindeterminingthecontentofRb1inNotoginsengbud.　　KeyC18100A5μm250mm×4.

2、6mm；試劑均為色譜純。人參皂苷Rb1對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用）。　　2方法與結(jié)果　　2.1色譜條件色譜柱AlltechPlatinumC18100A5μm250mm×4.6mm；流動相為乙腈-水（30∶70）；檢測波長為203nm。色譜圖見圖1～2。　　2.2供試品制備條件的考察　　2.2.1甲醇回流時間的考察考察了甲醇回流時間對人參皂苷Rb1提取的影響。結(jié)果見表1。依據(jù)結(jié)果，確定甲醇提取時間為4h。表1不同甲醇提取時間對含量測定的影響（略）　　2.2.2石油醚提取次數(shù)考察樣品用甲醇提取后，提取液用石油醚（30～60℃）萃取除雜，10m

3、l/次，考察不同提取次數(shù)對人參皂苷Rb1提取的影響。結(jié)果見表2。依據(jù)結(jié)果，為縮短樣品處理時間，確定石油醚提取次數(shù)為2次?！　?.2.580%乙醇洗脫用量及收集洗脫液量的考察考察不同80%乙醇洗脫用量及收集洗脫液量對人參皂苷Rb1提取的影響。結(jié)果見表5。依據(jù)結(jié)果，確定80%乙醇洗脫用量為80ml，收集洗脫液70ml。表5不同80%乙醇洗脫用量及收集洗脫液量的比較（略）　　2.3供試品溶液的制備取三七花藥材粉末（過3號篩）10g，精密稱定0.2g，置索氏提取器中，加氯仿60ml，加熱回流1h，棄去氯仿液，藥析揮去氯仿，加甲醇55ml，加熱回流4h，提取液揮干，加

4、水10ml溶解，加石油醚（30～60℃）提取2次，10ml/次，棄取醚液，水液通過D101型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1.5cm,長15cm），以水70ml洗脫，棄去水液，再用20%乙醇50ml洗脫，棄去20%乙醇洗脫液，繼用80%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液70ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。　　2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立取人參皂苷Rb1對照品約11mg，精密稱定，用甲醇定容至10ml容量瓶中，配制成濃度為1.16mg·ml-1的對照品溶液。用甲醇逐級稀釋成一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。按上述色譜條件進(jìn)樣HPLC分析，以峰面積（A

5、）對含量（Y）進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=0.0046A+0.1129r=0.9999，線性范圍為0.58～11.6μg?！　?.5精密度實驗取同一人參皂苷Rb1對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，精密度為0.55%?！　?.6穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液，于0，2，4，6，8h分別進(jìn)樣，精密度為0.83%?！　?.7重復(fù)性實驗取相同制法制備的同一批次5份樣品進(jìn)行測定，結(jié)果RSD為4.12%，表明重復(fù)性良好?！　?.8回收率實驗于三七花粉末中加入適量人參皂苷Rb1對照品標(biāo)準(zhǔn)液形成高、中、低3個濃度的樣品，按“2.3”處理后進(jìn)行HPLC分析，計算人參皂苷Rb1的

6、方法回收率，得回收率分別為102.88%，97.87%，103.57%。結(jié)果見表6。表6回收率實驗結(jié)果（略）　　2.9三七花藥材含量測定取三七花藥材粉末10g，精密稱定0.2g，按上述測定方法進(jìn)行HPLC測定。結(jié)果見表7。表7三七花藥材含量測定結(jié)果（略）　　3討論　　本文曾以三七塊根研究中常用的人參皂苷Rg1作為測定指標(biāo)建立含量測定方法，但在實驗中發(fā)現(xiàn)三七花中Rg1含量遠(yuǎn)少于Rb1，以其作為測定指標(biāo)有所不妥，與文獻(xiàn)報道相符?！　∮捎谌呋ㄖ兴M分較多，包括黃酮類、揮發(fā)油類、多糖類、氨基酸類等，且含有塊根所沒有的大量葉綠素，極易對測定造成干擾，故在供試品制備

7、中選用D101型大孔吸附樹脂，先用水洗去多糖，再用20%乙醇洗去黃酮類物質(zhì)，最后收集80%乙醇洗脫液，結(jié)果表明可起到較好的純化作用?！　难芯拷Y(jié)果看，云南文山的三七花總皂苷含量高于廣西靖西，表明不同產(chǎn)地的藥材有一定差異，選材時必須加以考慮。【參考文獻(xiàn)】　?。?］劉剛，鮑建材，鄭友蘭，等.三七化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］．人參研究，2004，2：10.　　［2］田國才.三七花治療心律失常的探討［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，2000，44：147.　?。?］周迎春，趙懷清，梁寧，等．高效液相色譜法同時測定三七總皂苷中人參皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1含量［J］

8、．沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2003，20(1)：27．