人參莖葉皂苷中人參皂苷re含量的反相高效液相色譜測定方法的改進(jìn)論文

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1、人參莖葉皂苷中人參皂苷Re含量的反相高效液相色譜測定方法的改進(jìn)論文.freelm×4.6mm，5μm）為色譜柱，采用梯度洗脫（乙腈與水），檢測波長203nm，流速1.0ml/min。結(jié)果人參皂苷Re的回歸方程為Y=9505.4488X－1159.6070，r＝0.9998，線性范圍為1.88～60.16μg/ml，平均回收率為99.35%(RSD=0.49%,n=6)。結(jié)論采用改進(jìn)的測定方法簡單、準(zhǔn)確和重現(xiàn)性好.freelprovetheHPLCmethodfordeterminationofginsenosidReinginsenosides.MethodsODSco

2、lumn（150mm×4.6mm，5μm）obilephaseconsistedofCH3-H2O,thedetection，andtheflol/min.ResultsTheregressionequationofginsenosideRel,theaveragerecoveryofginsenosidReethodissimple,quick,andreproducibleanditissuitableforthequalitycontrolofPanaxginseng.Key-packVP-ODS分析柱（150mm×4.6mm,5μm）；流動相為乙腈－水；流速1.

3、0ml/min；檢測波長203nm；柱溫：35℃；梯度條件見表1。表1流動相的梯度洗脫（略）在上述色譜條件下，人參皂苷Re與雜質(zhì)完全分離，人參皂苷Re的保留時間約17min（圖1～3），理論塔板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算大于2500。圖1空白溶液高效液相色譜圖（略）圖2人參皂苷Re對照品溶液高效液相色譜圖（略）圖3樣品溶液高效液相色譜圖（略）2.2對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品5mg（真空干燥至恒重）置25ml量瓶中，加少量甲醇，超聲溶解30min，待溶液恢復(fù)常溫后，用甲醇稀釋至刻度，用0.22μm的微孔濾膜過濾溶液備用。2.3線性關(guān)系考察精密吸取上述人參皂苷R

4、e對照品溶液，分別進(jìn)樣0.25，0.50，1.0，2.0，4.0，8.0μl，按上述色譜條件測定峰面積。以人參皂苷Re對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)線性回歸，人參皂苷Re的回歸方程為：Y=9505.4488X－1159.6070，r＝0.9998，在1.88～60.16μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.4精密度實(shí)驗(yàn)對含人參皂苷Re低、中、高3種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于同日內(nèi)分別測定6次，并對上述3種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液于不同天分別測定6次。結(jié)果見表2。2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)吸取同一供試樣品溶液分別于0，4，6，8h及第1，2，4天后分別測定結(jié)果RSD分別為0.

5、63%，1.13%，表明該樣品溶液3d內(nèi)穩(wěn)定。2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號樣品（20070401批號），照“2.2”項(xiàng)下方法制備6份，分別測定，計(jì)算RSD為0.52％。表2日內(nèi)及日間差異實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）2.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法。分別精密稱取已測知含量的樣品（含量人參皂苷Re12.2%）約10mg，共計(jì)6份，每2份為1組，每組分別加入18.80μg/ml的人參皂苷Re對照品1，5，10ml，精密加甲醇至50ml，密塞、超聲提取30min，放冷，用甲醇補(bǔ)足失重，用0.22μm濾膜過濾，測定實(shí)際含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。表3回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）2.8供試品溶液的制備

6、取（20070401批號）樣品，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，以人參皂苷Re含量為優(yōu)選指標(biāo)，分別超聲處理15，30，45min。結(jié)果表明超聲處理30min為最佳提取時間。取供試品約10mg，精密稱定，至25ml量瓶中加甲醇，超聲溶解30min，待溶液恢復(fù)常溫后，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm濾膜過濾，即得。2.9樣品測定按“2.2”項(xiàng)的方法進(jìn)行處理3批樣品，照上述色譜條件，反復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果見表4。表4樣品含量測定結(jié)果（略）3討論為了提高分離效能，本實(shí)驗(yàn)采用梯度洗脫的方法。流動相比例的確定：在上述色譜條件下，本實(shí)驗(yàn)對流動相A相、B相分別選擇了不同比例的甲

7、醇與水(磷酸溶液)、乙腈與水和多種梯度條件進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果證明，流動相選擇乙腈與水進(jìn)行梯度洗脫，人參皂苷Re與雜質(zhì)分離效果最好。該方法靈敏、準(zhǔn)確可靠，可以作為人參莖葉皂苷中人參皂苷Re的含量測定方法?！?/p>