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1、槲皮素對人卵巢癌HO【關(guān)鍵詞】槲皮素卵巢癌增殖凋亡 Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofquercetinonproliferationandapoptosisofHO-8910ovariancancercellinvitro.MethodsTheproliferationofcellsethod.Cellcycleandapoptoticpercentageetry(FCM).Theexpressionofp53andBcl-2es.Thefloetryshoaybethemechanismofapoptosisofova
2、riancancerbyquercetin.Keya公司），25℃溶于DMSO中；Bcl-2抗體(FITC)及p53抗體(FITC)及同型對照為pharminga公司；胰蛋白酶、RPMI-1640(華美生物公司)；MTT及二甲亞砜DMSO（sigma公司）?！ ?.2方法 1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) 人卵巢癌HO-8910細(xì)胞株，培養(yǎng)基為RPMI-1640內(nèi)含10%滅活胎牛血清、37℃、5%二氧化碳的飽和濕度培養(yǎng)傳代。 1.2.2實驗分組 共分5組：實驗組：加入槲皮素，終濃度分別為10.0μmol/L，20.0μmol/L,40.0μmol/L及80.0μmol
3、/L組；對照組：加入等量的同型IgG1單克隆抗體。(每組設(shè)6個復(fù)孔) 1.3實驗指標(biāo)的檢測 1.3.1MTT試驗取對數(shù)生長期的HO-8910細(xì)胞，制成濃度為1×105個/mL的單細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔200μL，過夜貼壁后；實驗組加入10.0μmol/L，20.0μmol/L,40.0μmol/L及80.0μmol/L的槲皮素，對照組加等量的同型IgG1單克隆抗體。每組設(shè)6個復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)24、48h后加入MTT(5mg/mL)20μL/孔，4h后吸凈上清液，加入DMSO20μL/孔，震蕩10min，用酶標(biāo)記光儀在波長為560nm時測定每孔的吸
4、光度(A)值，計算不同濃度抗體對細(xì)胞增殖的抑制率［抑制率=(對照組A均值-實驗組的A均值)/對照組A均值］［2］?！ ?.3.2流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期取對數(shù)生長期的HO-8910細(xì)胞，制成濃度為1×106個/mL的單細(xì)胞懸液，接種于6孔培養(yǎng)板中，按上述濃度培養(yǎng)48h后，收集細(xì)胞，PBS洗滌，制成單細(xì)胞懸液，用70%的冰乙醇4℃固定12h，用含核糖核酸酶及碘化丙錠的染液染30min，上流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測?！ ?.3.3流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率取對數(shù)生長期的HO-8910細(xì)胞，制成濃度為1×106個/mL的單細(xì)胞懸液，接種于6孔培養(yǎng)板中，按上述濃度培養(yǎng)48h后，收集
5、細(xì)胞，用AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)記染色后做流式細(xì)胞儀雙色分析?！ ?.3.4流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和p53蛋白表達(dá)取對數(shù)生長期的HO-8910細(xì)胞，制成濃度為1×106個/mL的單細(xì)胞懸液，接種于6孔培養(yǎng)板中，按上述濃度培養(yǎng)48h后，收集細(xì)胞，70%的冰乙醇4℃固定過夜，洗去乙醇，取1×106個細(xì)胞加10mLFITC標(biāo)記的抗Bcl-2和p53抗體及同型IgG1單克隆抗體，在4℃暗處孵育30min洗去多余單抗。上流式細(xì)胞儀獲取信息（本實驗重復(fù)4次）。實驗結(jié)果顯示：槲皮素對HO-8910細(xì)胞的生長具有明顯的抑制作用,實驗范圍內(nèi)最大抑制率
6、達(dá)67.01%，且抑制作用隨藥物濃度增加、作用時間延長而增強(qiáng)，呈現(xiàn)劑量、時間依賴性作用,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗差異具有顯著性意義(P<0.01，見表1)。表1實驗組和對照組卵巢癌細(xì)胞內(nèi)的吸光度值和增殖抑制率(略)注：*每個濃度組與前一濃度組比較P<0.01；△每個時間段與前一時間段比較P<0.01 2.2槲皮素對卵巢癌細(xì)胞周期分布和凋亡率的影響 不同濃度槲皮素作用卵巢癌細(xì)胞48h后，與對照組相比，細(xì)胞周期分布、凋亡率均發(fā)生改變，即G1/G0期細(xì)胞比例數(shù)上升，S期和G2/M期下降，細(xì)胞凋亡率上升，均有顯著差異(P<0.05)，且與槲皮素濃度之間具
7、有劑量依賴性(P<0.05，見表2)。表2槲皮素對卵巢癌細(xì)胞周期分布和凋亡率的影響(略)注：*每個濃度組與前一濃度組比較P<0.01 2.3槲皮素對凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、p53表達(dá)的影響不同濃度槲皮素作用卵巢癌細(xì)胞48h后，與對照組相比，促凋亡蛋白p53表達(dá)上調(diào)，而凋亡抑制蛋白Bcl-2表達(dá)下降，均有顯著差異(P<0.01)，且與槲皮素濃度之間具有劑量依賴性(P<0.01，見表3)。表3槲皮素對凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、p53表達(dá)的影響(略)注：*每個濃度組與前一濃度組比較P<0.013討論槲皮素是一種具有多種生物學(xué)活性的黃酮類化
8、合物，廣泛分布于被子植物
