激素對(duì)魔芋球莖愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生的影響

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1、激素對(duì)魔芋球莖愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生的影響  以魔芋球莖為外植體,采用附加不同種類和濃度的生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素的MS培養(yǎng)基,研究激素對(duì)魔芋愈傷組織誘導(dǎo)、生長(zhǎng)和分化的影響。結(jié)果表明:在適量的生長(zhǎng)素配合作用下,6-BA濃度為1.5mg/L,有利于球莖愈傷組織誘導(dǎo)增殖,濃度增加為2.0mg/L,則有利于芽的分化;6-BA濃度一定時(shí),生長(zhǎng)素濃度較高,愈傷長(zhǎng)勢(shì)旺盛,但分化出苗較慢,生長(zhǎng)素濃度偏低,愈傷增殖較慢,但芽分化較快。分析了不同種類激素的作用效果,認(rèn)為適合花魔芋球莖植株再生的最適培養(yǎng)基是MS+6-BA1.5~2.0mg/L+

2、NAA0.1~0.5mg/L?! £P(guān)鍵詞魔芋;球莖;組織培養(yǎng);激素  S632.3A1007-5739(2014)22-0067-02  EffectofHormoneonCallusInductionandPlantRegenerationfromCormExplantsofAmorphophalluskonjac  XUXiao-yanTANGS培養(yǎng)基,研究自育魔芋新品系M26的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基,為進(jìn)一步完善魔芋組培技術(shù)以及M26的組培擴(kuò)繁提供依據(jù)?! ?材料與方法  1.1試驗(yàn)材料  試驗(yàn)材料為花魔芋新品系M26球

3、莖?! ?.2愈傷組織誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)  球莖用自來(lái)水沖洗干凈后晾干,在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)去皮,切成較大的組織塊,放在75%酒精中浸泡1min,轉(zhuǎn)入0.1%HgCl2中進(jìn)行表面消毒12min,用無(wú)菌水沖洗3次,切成1.0cm1.0cm0.5cm的小塊(每塊約重0.5g),接種在8種不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上(表1,MS基本培養(yǎng)基附加不同的激素組合,pH值6.0,蔗糖濃度30g/L,瓊脂7.8g/L,每瓶培養(yǎng)基容量為30mL)。每處理接種12瓶,每瓶5個(gè)外植體,3次重復(fù)。外植體接種后在25℃室溫的電熱培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)30d后,不切割轉(zhuǎn)接到

4、相同的新鮮培養(yǎng)基上繼代增殖。培養(yǎng)20d時(shí)調(diào)查愈傷誘導(dǎo)率,60d時(shí)調(diào)查芽分化率和愈傷塊重。  1.3芽點(diǎn)分化培養(yǎng)  將上述不同培養(yǎng)基上誘導(dǎo)形成的愈傷組織切割成0.5cm見方的小塊,轉(zhuǎn)入MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L的統(tǒng)一分化培養(yǎng)基中,進(jìn)行愈傷組織繼代和芽點(diǎn)分化培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度(25±2)℃,光照時(shí)間12h,光照強(qiáng)度1500~2000lx,培養(yǎng)30d時(shí)調(diào)查不定芽誘導(dǎo)率、無(wú)效愈傷百分率(愈傷組織在繼代培養(yǎng)過程中褐變死亡或呈水漬狀萎縮不生長(zhǎng)的愈傷,該文通稱為無(wú)效愈傷)?! ?.4再生植株的培養(yǎng)及

5、生根  將繼代分化培養(yǎng)中形成的不定芽帶一定愈傷組織切割轉(zhuǎn)入壯苗生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.05mg/L上培養(yǎng),培養(yǎng)溫度(25±2)℃,光照時(shí)間12h,光照強(qiáng)度1500~2000lx。未形成不定芽的愈傷組織切割后在新鮮分化培養(yǎng)基上繼續(xù)分化培養(yǎng)?! ?結(jié)果與分析  2.1愈傷組織誘導(dǎo)和生長(zhǎng)  從表1可以看出,8種不同配方均能誘導(dǎo)愈傷形成,多數(shù)外植體接種1周后開始增厚,20d在切口表面形成一層很薄的白色愈傷組織,并不斷增殖,逐漸膨大呈瘤狀,顏色也不斷加深,一般位于外植體上部的愈傷為淡黃色或粉紅色,靠近培養(yǎng)基

6、底部的愈傷為棕紅色。不同配方的愈傷誘導(dǎo)率不同。8種培養(yǎng)基中,MS8、MS5、MS4、MS3誘導(dǎo)率均高達(dá)95%以上,顯著高于其他4種配方;其次是MS6和MS7,分別為84.0%和81.4%;MS1和MS2較低,分別為67.5%和72.8%。  愈傷組織在原誘導(dǎo)培養(yǎng)基上均可以生長(zhǎng)增殖,但不同培養(yǎng)基上愈傷組織生長(zhǎng)速度并不一致。培養(yǎng)60d后,外植體的重量由初次接種的0.5g增加到1.2~2.0g,重量增加了1~3倍。MS5、MS6、MS7等培養(yǎng)基增殖較快,顯著優(yōu)于其他培養(yǎng)基,其中增殖最快的是MS5,可能是加入了2,4-D的緣故

7、。  在6-BA濃度為1.5mg/L的培養(yǎng)基中,球莖愈傷誘導(dǎo)率普遍較高,增殖較快,說(shuō)明采用該濃度有利于魔芋球莖愈傷組織的誘導(dǎo)和增殖,這一結(jié)果與陳永波等[3]的研究結(jié)果一致?! ?.2不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基形成的愈傷組織分化能力比較  將誘導(dǎo)培養(yǎng)基上得到的愈傷組織轉(zhuǎn)入到統(tǒng)一的分化培養(yǎng)基上進(jìn)行分化培養(yǎng),部分愈傷組織繼續(xù)增殖,并繼續(xù)分化形成不定芽或根;部分愈傷組織只增殖,未見芽點(diǎn)分化出現(xiàn);還有部分愈傷組織褐化壞死或停止生長(zhǎng)。從表2可以看出,MS2、MS3、MS7、MS8等配方芽分化早,接種60d后即有少量芽點(diǎn)出現(xiàn);MS6則過早出現(xiàn)根

8、器官,說(shuō)明培養(yǎng)基中的NAA濃度過高;MS4、MS5、MS6等6-BA濃度為1.5mg/L的培養(yǎng)基上形成的愈傷在分化培養(yǎng)中長(zhǎng)勢(shì)旺盛,褐變輕,但分化速度較慢,分化率偏低;MS7、MS8等6-BA濃度為2.0mg/L的培養(yǎng)基,其愈傷組織增殖相對(duì)較慢,但分化快,分化率高,同時(shí)培養(yǎng)基褐變較重,可添加PVP控制褐變。  總之,該試驗(yàn)球莖愈傷組

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