malbac技術(shù)簡(jiǎn)介

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1、Malbac-MALBAC原理MALBAC（MultipleAnnealingandLoopingBasedAmplificationCycles，簡(jiǎn)稱MALBAC），即多次退火環(huán)狀循環(huán)擴(kuò)增技術(shù)，是基于哈佛大學(xué)謝曉亮院士研究組的一項(xiàng)專利技術(shù)，是目前最先進(jìn)的全基因組擴(kuò)增技術(shù)。該技術(shù)及其在研究人類精子重組方面的獨(dú)特應(yīng)用2篇論文于2012年12月刊登于頂級(jí)學(xué)術(shù)期刊《Science》上。技術(shù)優(yōu)勢(shì)1）降低PCR擴(kuò)增偏倚，使得單細(xì)胞中93%的基因組能夠被測(cè)序。這種方法使得檢測(cè)單細(xì)胞中較小的DNA序列變昇變得更容易，因

2、此能夠發(fā)現(xiàn)個(gè)別細(xì)胞之間的遺傳差界。這樣的差異可以幫助解釋癌癥惡化的機(jī)制，生殖細(xì)胞形成機(jī)制，甚至是個(gè)別神經(jīng)元的差異機(jī)制。2）靈敏度高：?jiǎn)渭?xì)胞、單染色體或0.5pg的基因組DNA即可進(jìn)行擴(kuò)增。3）擴(kuò)增均勻性顯著優(yōu)于其它技術(shù)。4）擴(kuò)增產(chǎn)物用途廣泛：可用于二代測(cè)序、微陣列、qPCR、基因克隆。技術(shù)簡(jiǎn)介及原理PCR擴(kuò)增往往具有偏好性而且基因組具有大量的冗余，會(huì)造成基因組測(cè)序準(zhǔn)確性不高。而謝曉亮研發(fā)的MALBAC技術(shù)能從一個(gè)細(xì)胞的基因組中，分離出來(lái)自單細(xì)胞的DNA，然后添加稱作引物的短DNA分子。這些引物可與DNA的

3、隨意部分互補(bǔ)，從而使得它們能夠附著到DNA鏈上，充當(dāng)DNA復(fù)制起點(diǎn)。這些引物巾兩個(gè)部分構(gòu)成——一個(gè)包含8個(gè)核苷酸的粘性部分變化多樣，可與DNA結(jié)合，再加上一個(gè)包含27個(gè)核苷酸的共同序列。這一共同序列通過(guò)將A身?yè)饺氲叫驴截愭?，從而A身成環(huán)，防止了過(guò)度拷貝，從而大大地降低了擴(kuò)增偏倚。利用這種方法，可以完成高達(dá)93%的基因組測(cè)序。技術(shù)應(yīng)用1）樣本稀少，用常規(guī)方法無(wú)法進(jìn)行基因組或轉(zhuǎn)錄組分析癌癥研究（穿刺取樣、腫瘤循環(huán)細(xì)胞CTC,激光微切割組織）胚胎研究（早期胚胎發(fā)育、體外受精梢入前篩查）原始材料很少的法醫(yī)學(xué)、古生

4、物學(xué)干細(xì)胞研究2）樣本高度異質(zhì)，細(xì)胞之間存在重要差異腫瘤遺傳異質(zhì)性研究，如化療前后細(xì)胞種群及療效分析生殖細(xì)胞，如不孕不育癥研究、人類精子重組位點(diǎn)分析與染色體異常檢測(cè)、花粉細(xì)胞遺傳重組神經(jīng)元的差異機(jī)制輻射前后細(xì)胞差異分析Denaturation31PrimersannealonTemplatesDenaturation51ElongationandDisplacement5l3’ExtensionandDisplacementPrimersannealonSemi-ampljcons3’Formationo

5、floopsqPCR/PCRArrayCGHMolecularcloningHigh-throughputSequencing