建立pcr實(shí)驗(yàn)室基本條件

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1、建立PCR實(shí)驗(yàn)室的基本條件臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室采用PCR技術(shù)用于臨床基因診斷，由于PCR技術(shù)對(duì)所檢測(cè)的核酸模板進(jìn)行大量擴(kuò)增，容易出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室污染導(dǎo)致臨床檢測(cè)標(biāo)本假陽(yáng)性結(jié)果；另外由于PCR技術(shù)要求高、影響因素多（特別是RNA標(biāo)本），實(shí)驗(yàn)過程處理不當(dāng)易導(dǎo)致核酸模板無(wú)擴(kuò)增現(xiàn)象，導(dǎo)致臨床標(biāo)本假陰性結(jié)果。因此臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收和規(guī)范化管理是PCR技術(shù)本身需要，也是在臨床上順利應(yīng)用該技術(shù)前提。二、PCR實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收準(zhǔn)備工作（一）硬件準(zhǔn)備——實(shí)驗(yàn)室基本建設(shè)1.根據(jù)文件要求，臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)；標(biāo)本制

2、備區(qū)；擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)；擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測(cè)，此區(qū)域可不設(shè)。2.各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。3.進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一流向進(jìn)行，即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。4.不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。5.工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)n試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)2～8℃和-15℃冰箱：混勻器；微量加樣器（覆蓋1～1000μl）；移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水

3、紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）；專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。n標(biāo)本制備區(qū)2～8℃冰箱，-20℃或-80℃冰箱；高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)；混勻器；水浴箱或加熱模塊；微量加樣器（覆蓋1～1000μl）；可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；超凈工作臺(tái)，消耗品；一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）；專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。n擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)核酸擴(kuò)增儀；微量加樣器（覆蓋1～1000μl）；可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）；

4、專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。n擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)視檢測(cè)方法不同而定?；緝x器設(shè)備如下：微量加樣器（覆蓋1～200μl）；可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）；專用工作服和工作鞋；專用辦公用品等。（二）軟件建設(shè)——質(zhì)量手冊(cè)編寫與實(shí)施、人才資源（上崗證培訓(xùn)與相關(guān)知識(shí)學(xué)習(xí)）1.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量手冊(cè)編寫質(zhì)量手冊(cè)是闡明臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量方針，并描述過其質(zhì)量體系的文件。質(zhì)量手冊(cè)規(guī)定了質(zhì)量體系的基本結(jié)構(gòu)，是實(shí)施和保持質(zhì)量體系應(yīng)長(zhǎng)期遵循的文件。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室

5、質(zhì)量手冊(cè)編寫應(yīng)依照衛(wèi)生部下發(fā)兩個(gè)文件，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況編寫適合本實(shí)驗(yàn)室的切實(shí)可行的質(zhì)量手冊(cè)。質(zhì)量手冊(cè)的提綱應(yīng)包括三部分：質(zhì)量方針和宗旨；工作制度；標(biāo)準(zhǔn)操作文件（SOP）（1）質(zhì)量方針和宗旨制定臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理目標(biāo)和質(zhì)量保證體系的結(jié)構(gòu)體系和總方針。（2）工作制度一般應(yīng)包括以下文件：實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、布局及組織結(jié)構(gòu)；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度；實(shí)驗(yàn)室的人員配置及管理制度；生物的防護(hù)與安全制度；實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理制度；實(shí)驗(yàn)室清潔消毒制度；儀器設(shè)備的管理制度；儀器、試劑、耗材購(gòu)置程序及管理制度；臨床標(biāo)本的管理制度；實(shí)驗(yàn)室記錄的管理制度；質(zhì)量

6、控制工作管理制度；結(jié)果報(bào)告管理制度；抱怨的內(nèi)部處理制度；負(fù)責(zé)人及質(zhì)檢員職責(zé)；崗位設(shè)置和責(zé)任制等……（3）標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）一般包括：消毒液配制標(biāo)準(zhǔn)操作程序：消毒標(biāo)準(zhǔn)操作程序；超凈工作臺(tái)使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序；超凈工作臺(tái)維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作文件；PCR儀使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序；PCR儀維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；高速低溫離心機(jī)使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序；移液器使用標(biāo)準(zhǔn)操作程序；冰箱維護(hù)和保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；電熱恒溫水浴箱操作程序；電子天平使用和校正操作程序；可移動(dòng)紫外消毒車使用操作程序；加樣器校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；離心機(jī)維護(hù)保養(yǎng)操作程序；溫度計(jì)校準(zhǔn)程序；試劑的質(zhì)檢操作程序

7、；標(biāo)本唯一標(biāo)識(shí)編號(hào)編制規(guī)則；臨床標(biāo)本的采集及處理操作程序；臨床標(biāo)本的保存程序；乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；丙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；結(jié)核分枝桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序；沙眼衣原體核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序等……（4）引用圖表：PCR擴(kuò)增可接受標(biāo)本記錄表；PCR擴(kuò)增拒收標(biāo)本記錄表；室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果記錄表；室間質(zhì)控記錄表；消耗性材料驗(yàn)收記錄表；試劑驗(yàn)收記錄表；故障處理表；臺(tái)階式高速離心機(jī)使用記錄表；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)使用記錄表；擴(kuò)增儀維護(hù)保養(yǎng)記錄表；人員培訓(xùn)計(jì)劃及培訓(xùn)記錄表；實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表；主要設(shè)備一覽表；實(shí)驗(yàn)室

8、清潔消毒記錄表；工作區(qū)溫度、濕度記錄表；抱怨記錄表；標(biāo)本超低溫保存記錄表；應(yīng)急處理記錄表；垃圾處理記錄表；冰箱溫度記錄表；水浴箱溫度記錄表；移動(dòng)紫外消毒車記錄表；設(shè)備校正記錄表；