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《小鼠抗豬囊尾蚴單鏈?zhǔn)删w抗體庫構(gòu)建》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、小鼠抗豬囊尾蚴單鏈?zhǔn)删w抗體庫的構(gòu)建前言豬囊尾蚴病cysticerosiscellulosae是由豬帶絳蟲Taniasolium的幼蟲引起的一種人畜共患寄生蟲病流行范圍廣不僅嚴(yán)重危害人體健康還給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失據(jù)調(diào)查我國人群豬帶絳蟲感染率達(dá)0.112%囊蟲感染雖無準(zhǔn)確數(shù)字且囊蟲病患者明顯少于絳蟲病患者但危害嚴(yán)重礙肢體癱瘓甚至昏迷死亡其中腦囊蟲病患者尤甚嚴(yán)重者可引起失明精神障目前對此病的最佳防治手段應(yīng)該是藥物治療和疫苗預(yù)防相結(jié)合然而由于豬囊蟲寄生部位特殊生活史復(fù)雜抗原成分
2、眾多且變異發(fā)生迅速使得防治工作的難度仍然是有增無減尤其是人囊蟲病的診斷治療和預(yù)防在寄生蟲學(xué)研究領(lǐng)域診斷和疫苗是兩大熱點(diǎn)隨著分子生物學(xué)及基因工程技術(shù)的發(fā)展國內(nèi)外對寄生蟲疫苗研究集中在分子疫苗的制備但目前對許多寄生蟲的抗原表位蛋白分子免疫識別以及抗原抗體的相互作用尚缺乏足夠的了解沒有突破性的進(jìn)展因此在研究手段上需要人們另辟蹊徑自1975年單克隆抗體技術(shù)問世以來特別是在寄生蟲研究中的應(yīng)用使得豬囊蟲的免疫診斷和預(yù)防都取得了重大的進(jìn)展但由于其操作復(fù)雜效率低等缺點(diǎn)已無法滿足現(xiàn)實(shí)需求
3、隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)的研究進(jìn)展抗體的研究已進(jìn)入基因工程抗體時(shí)代九十年初抗體庫技術(shù)特別是噬菌體抗體庫技術(shù)的問世成為抗體革命中的突破性進(jìn)展從此利用噬菌體表面展示技術(shù)制備人源化多功能化高親和力的特異性抗體成為可能噬菌體抗體庫技術(shù)是用PCR擴(kuò)增出抗體的全套可變區(qū)基因?qū)⒖贵w分子DNA片段如Fab或單鏈抗體ScFv與噬菌體外殼蛋白基因P或P連接使融合蛋白表達(dá)于噬菌體顆粒的表面就形成了噬菌體抗體庫經(jīng)過吸附洗脫一擴(kuò)增”過程富集篩選特異性抗體這一技術(shù)將抗體基因型與表型聯(lián)系在一起,將抗體識
4、別抗原的能力和噬菌體擴(kuò)增的能力結(jié)合在一起通過免疫親和篩選直接得到特異的抗體基因可進(jìn)一步進(jìn)行基因工程改造因此噬菌體抗體庫技術(shù)可以被認(rèn)為是體內(nèi)抗體生成過程的模擬首先建立足夠多樣性的抗體庫然后通過免疫親和篩選即可能得到針對任何抗原的抗體該技術(shù)省時(shí)省力無需經(jīng)過雜交瘤甚至不經(jīng)過免疫在制備人抗體方面顯示無可比擬的優(yōu)越性解決了傳統(tǒng)的人雜交瘤系統(tǒng)低效的難題利用噬菌體抗體庫技術(shù)還可能產(chǎn)生體內(nèi)不存在的新的特異抗體該技術(shù)將抗體的基因在原核或真核系統(tǒng)表達(dá)可大規(guī)模制備抗體1997年澳大利亞的FOIey小
5、組[3]用噬菌體表面展示技術(shù)從鼠源性抗瘧疾疫苗的侯選分子單鏈可變區(qū)片段ScFv測序獲得了至少4個(gè)不同的ScFv基因序列為進(jìn)一步研究AMA1的結(jié)構(gòu)和功能奠定了基礎(chǔ)1目前新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士研究生論文Foley小組正在實(shí)驗(yàn)這些抗體片段在小鼠體內(nèi)外對瘧原蟲感染中的保護(hù)作用并認(rèn)為人源化的抗體能通過基因抗體工程菌大量廉價(jià)生產(chǎn)可用于今后瘧疾的治療和診斷人們預(yù)測噬菌體抗體庫技術(shù)將逐步取代傳統(tǒng)的雜交瘤技術(shù)生物技術(shù)領(lǐng)域極具應(yīng)用前景2成為生產(chǎn)人單克隆抗體的主要手段在小鼠抗豬囊尾蚴單鏈?zhǔn)删w抗體庫的構(gòu)建文獻(xiàn)綜述
6、噬菌體抗體庫技術(shù)及其研究進(jìn)展隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展抗體的研究已進(jìn)入基因工程抗體時(shí)代九十年代初抗體庫技術(shù)特別是噬菌體抗體庫技術(shù)的問世成為抗體制備技術(shù)的革命性突破標(biāo)志著利用噬菌體表面展示技術(shù)制備人源化多功能化高親和力特異性抗體成為可能噬菌體抗體庫技術(shù)是用PCR擴(kuò)增出抗體的全套可變區(qū)基因將抗體分子DNA片段如Fab或單鏈抗體ScFv與噬菌體外殼蛋白基因P或PV連接使融合蛋白表達(dá)于噬菌體顆粒的表面就形成了噬菌體抗體庫經(jīng)過吸附洗脫一擴(kuò)增過程富集篩選特異性抗體這一技術(shù)將抗體
7、基因型與表型聯(lián)系在一起將其識別抗原的能力和噬菌體的可擴(kuò)增性統(tǒng)一起來較好的模擬了體內(nèi)抗體產(chǎn)生的過程成為一種高效的篩選體系本文就應(yīng)用絲狀噬菌體展示系統(tǒng)構(gòu)建噬菌體抗體庫的原理方法及其研究進(jìn)展進(jìn)行綜述一噬菌體展示技術(shù)系統(tǒng)用于蛋白質(zhì)展示的系統(tǒng)主要有3種1.噬菌體展示系統(tǒng)2.噬粒展示系統(tǒng)3.細(xì)菌細(xì)胞表面展示系統(tǒng)其中以前兩種系統(tǒng)較為成熟為大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用構(gòu)建噬菌體展示系統(tǒng)的噬菌體包括?噬菌體T4噬菌體和絲狀噬菌體目前廣泛應(yīng)用的是絲狀噬菌體展示系統(tǒng)絲狀噬菌體是單鏈DNA病毒PV和P分別是噬菌體顆
8、粒的主要表面衣殼蛋白和次要衣殼蛋白P位于噬菌體顆粒的一端每個(gè)顆粒約有35個(gè)拷貝噬菌體依靠P感染雄性大腸桿菌PV構(gòu)成噬菌體顆粒的側(cè)壁每個(gè)顆粒約有3000個(gè)拷貝噬菌體展示技術(shù)即是將編碼外源肽或蛋白的DNA片段插入噬菌體或噬菌粒的基因組中然后以融合的形式與噬菌體的衣殼蛋白共同表達(dá)于噬菌體表面以利于配體的識別和結(jié)合而插入的DNA片段對噬菌體的生物學(xué)特性無大的影響[1]P和PV正是目前最常用的噬菌體融合蛋白P有兩個(gè)位點(diǎn)可供外源DNA插入既N端和近N端可伸屈臂
