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《液相色譜實(shí)用技術(shù)_色譜柱的使用及保養(yǎng)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、液相色譜實(shí)用技術(shù)色譜柱的使用及保養(yǎng)良好的色譜實(shí)驗(yàn)習(xí)慣拿到一根新色譜柱時(shí)，先測(cè)柱效保留在新色譜柱上測(cè)得的色譜圖，并記錄條件定期檢測(cè)柱效定期檢測(cè)儀器的譜帶展寬色譜柱的使用及操作流動(dòng)相的轉(zhuǎn)換特別是GPC柱流速(壓力)的變化幅度溫度的變化幅度專用色譜柱∶樣品及溶劑的要求色譜柱的保養(yǎng)（一）樣品方面除去微粒及雜質(zhì)了解樣品在流動(dòng)相中的溶解度如樣品的溶劑不是流動(dòng)相，一定要用流動(dòng)相試溶解度，防止其在流動(dòng)相中析出了解樣品與色譜柱的基質(zhì)/填料是否相互作用色譜柱的保養(yǎng)（二）流動(dòng)相方面除去微粒純度的要求超純水，梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)水中有機(jī)雜質(zhì)含量要低緩沖液的pH值，在填料的允許范圍內(nèi)緩沖液
2、（鹽）的濃度溶劑：色譜純，并與填料相匹配溶劑中的雜質(zhì)含量流動(dòng)相對(duì)樣品的溶解度有機(jī)溶劑或水的比例在線的保護(hù)裝置給色譜柱提供物理的保護(hù)除去樣品及流動(dòng)相中的顆粒給色譜柱提供化學(xué)的保護(hù)防止分析柱被化學(xué)污染裝置在線過濾器自裝填料保護(hù)柱預(yù)裝保護(hù)柱在線過濾器In-LineFilter，部件號(hào)WAT084560防止顆粒在色譜柱頭累積優(yōu)點(diǎn)：基本不影響柱效在需要高柱效的分析時(shí)中常用（如：氨基酸分析）可更換的消耗品更換濾芯，部件號(hào)WAT005139(5/pkgs)更換墊圈，部件號(hào)WAT084567(10/pkgs)保護(hù)柱可避免化學(xué)污染。多數(shù)保護(hù)柱影響到整個(gè)色譜柱的柱效，特別是
3、在用微柱時(shí)保護(hù)柱的種類普通自裝填料的保護(hù)柱Waters的部件號(hào)，WAT084550，用戶自裝填料影響柱效同裝填技術(shù)有關(guān)，柱效降低較大Guard-Pak預(yù)裝保護(hù)柱Waters的部件號(hào)，WAT088141有各種填料的預(yù)裝柱供選擇，使用方便。填料容積較小，也引起柱效降低可換芯式保護(hù)柱新型的保護(hù)柱—SentryGuard適應(yīng)的用戶類型非常臟,非常復(fù)雜的樣品本底生化樣品,溶液環(huán)境樣品食品不想作太多的固相萃取不想降低柱效新型的保護(hù)柱—SentryGuardSentryGuard的特點(diǎn)特點(diǎn)高質(zhì)量,高效填料-不損失柱效增加分析柱效-增加適應(yīng)范圍20mm柱長(zhǎng)-臟樣品載荷能
4、力大，能延長(zhǎng)保護(hù)柱壽命手可擰緊接頭，安裝時(shí)不需要工具通用柱套-適用于所有的HPLC柱(3.9及4.6內(nèi)徑)整體式（對(duì)Waters柱）-使用方便，容易各種不同填料配合Waters柱SentryGuard的規(guī)格產(chǎn)品描述3.9?20mm柱長(zhǎng)適應(yīng)任何色譜柱，不需工具即可安裝及更換可換柱芯式設(shè)計(jì)，提供各種填料:?BondaPak:C18,phenyl,CN,NH2,SilicaNova-Pak:C18,C8,phenyl,CN,SilicaResolve:C18,C8,SilicaDelta-Pak:C18,C4Symmetry:C18,C8色譜柱的清洗對(duì)所做的樣
5、品要有充分的了解用對(duì)該樣品洗脫能力最強(qiáng)的流動(dòng)相清洗硅膠柱的一般方法先用甲醇洗去極性雜質(zhì)用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200ml依次活化鍵合相柱(烷基)的一般方法20倍柱體積的：甲醇-氯仿-甲醇-水依次沖洗色譜柱的存放存放前的處理除去雜質(zhì)、鹽合適的存放溶劑避免色譜柱床的干枯避免機(jī)械震動(dòng)防止細(xì)菌生長(zhǎng)注意存放的溫度色譜柱常見毛病柱壓過高多少才算高?不同色譜柱有差異不同系統(tǒng)有差異不同溶劑有差異柱效低重復(fù)性差不出峰，回收率低柱壓過高為什么柱壓會(huì)過高微粒堵塞樣品流動(dòng)相密封墊柱床膨脹不可逆吸附細(xì)菌生長(zhǎng)柱效低為什么柱效低色譜柱被污染過濾片部分堵塞樣品、流動(dòng)相或密封
6、墊的細(xì)小顆粒造成的堵塞色譜柱內(nèi)的死體積流動(dòng)相pH值及組成不合適造成固定相流失流速急劇變化造成固定相物理損壞機(jī)械震動(dòng)造成固定相產(chǎn)生裂縫柱床收縮或干枯重復(fù)性差、回收率低實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性差色譜柱被污染流動(dòng)相pH值及組成不合適造成鍵合相流失樣品溶劑不同或樣品本身不穩(wěn)定回收率低，不出峰“不可逆”吸附固定相過強(qiáng)或流動(dòng)相過弱非特異性吸附色譜柱以外的因素（一）“柱效”問題，不一定是色譜柱問題！儀器問題：連接不好造成死體積進(jìn)樣器檢測(cè)器管路，連接口保護(hù)柱在線過濾器堵塞流動(dòng)相問題：色譜柱未平衡好進(jìn)樣量太大色譜柱與儀器的聯(lián)接除HP外，不同公司產(chǎn)品，其接頭不同。處理不當(dāng)時(shí)，會(huì)造成：色
7、譜峰展寬（死體積）使柱效下降、或滲漏解決辦法：自制相應(yīng)的轉(zhuǎn)換接頭使用“通用”型接頭（錐箍及螺母）這種錐箍在不銹鋼管上是活動(dòng)的，因此可以換接不同的色譜系統(tǒng)及色譜柱。從PhaseSeparations公司能得到一些PEEK工程塑料的接頭，可用在所有類型的色譜柱上的。Waters色譜柱的聯(lián)接Waters及PhaseSeparations錐箍及螺母相同，但錐箍前露出不銹鋼管長(zhǎng)度不同，其長(zhǎng)度被稱為：“stop-depth”Waters除Spherisorb以外的各種品牌的色譜柱用的是“Waters”標(biāo)準(zhǔn)，其stop-depth的長(zhǎng)度為0.130英寸Spheriso
8、rb品牌的色譜柱及PhaseSeparations公司其他品牌色譜柱用的是“Pa
