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1、常用液相色譜柱使用與保養(yǎng)SOP主要內(nèi)容1、液相色譜柱基本理論知識(shí)2、常用液相色譜柱使用方法與維護(hù)保養(yǎng)3、液相色譜柱常見(jiàn)問(wèn)題分析與解決方案1.2液相色譜柱的結(jié)構(gòu)及其主要功能液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。柱管：多用不銹鋼制成，若果使用時(shí)柱壓不高于70kg/cm2時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。壓帽：即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。密封環(huán)：位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán)，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外
2、壁的密封。1.3液相色譜柱的分類(lèi)與應(yīng)用范圍分類(lèi)方法很多，可按鍵合相類(lèi)型、用途（分析型與制備型）、基質(zhì)種類(lèi)等進(jìn)行分類(lèi)。1.3.1硅膠基質(zhì)柱（4大類(lèi)）目前，分析型液相色譜柱多為硅膠基質(zhì)柱，細(xì)分為：高純硅膠柱：以高純度硅烷化硅膠（Silica）為填料，應(yīng)用范圍較廣，但只能在PH2.0-7.5，小于60度的條件下使用。又由于強(qiáng)極性硅羥基（Si-OH)的次級(jí)保留效應(yīng)較強(qiáng)，所以應(yīng)用受到局限，已被鍵合相柱所取代。反相硅膠柱：是以硅烷化硅膠為基質(zhì)，表面鍵合弱極性官能團(tuán)的固定相。目前多用C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（phenyl，苯基）等。用于分離大
3、多數(shù)有機(jī)化合物，應(yīng)用范圍最廣。正相硅膠柱：是以硅烷化硅膠為基質(zhì)，表面鍵合極性官能團(tuán)的固定相。目前較多的為：NH2—（氨基）、CN—（氰基）、DIOL（二羥基，也常做HILIC單獨(dú)分類(lèi)列出，多用于分離有機(jī)酸、蛋白質(zhì)等）。多用于分離光學(xué)異構(gòu)體和反相柱子不能分離的極性比較大的物質(zhì)。離子交換柱：是以硅烷化硅膠為基質(zhì)，以磺化交聯(lián)鍵合強(qiáng)陽(yáng)/陰離子基團(tuán)（磺酸鹽/季銨堿）的固定相，又分為強(qiáng)酸性、強(qiáng)堿性、弱酸性、弱堿性等不同規(guī)格。用于分離解離性較強(qiáng)的有機(jī)鹽類(lèi)化合物。（注意：不要同離子色譜混淆，離子色譜主要是分離無(wú)機(jī)鹽類(lèi)化合物或某些帶點(diǎn)離子。）1.3.2聚合物基質(zhì)柱聚合物基質(zhì)柱
4、是指采用聚苯乙烯—二乙烯基苯、聚甲基丙烯酸脂、多孔性微球蛋白等聚合物凝膠作為主要填料的一類(lèi)色譜柱。其相對(duì)于硅膠柱具有更強(qiáng)的疏水性及更寬泛的pH范圍（1.0～14.0），但柱效較低，目前主要應(yīng)用于凝膠滲透色譜（GPC）、凝膠過(guò)濾色譜（GFC）及分子排阻色譜（MEC）。主要用于分離蛋白質(zhì)類(lèi)等大分子化合物。1.3.3其他無(wú)機(jī)物填料柱這類(lèi)色譜柱僅限于特殊用途，主要有石墨化碳、氧化鋁（Al2O3）、氧化鋯（ZrO2）等填料。不需要進(jìn)行表面改性，其自身表面即可對(duì)各類(lèi)化合物有強(qiáng)保留?？稍谌我鈖H（氧化鋁除外，不能大于12.0）及高溫度（可達(dá)100℃）下使用。其中，石墨化碳
5、填料柱能分離多種化合物，主要用于分離幾何異構(gòu)體；氧化鋁柱剛性強(qiáng)，柱床穩(wěn)定，可分離多種化合物且多用于制備色譜；氧化鋯柱較氧化鋁柱有更強(qiáng)的pH適用范圍及能耐受更高的溫度，但其應(yīng)用尚待進(jìn)一步研究。1.3.4建立色譜柱檔案應(yīng)同色譜儀器檔案一樣重視色譜柱檔案，主要內(nèi)容包括：品牌、型號(hào)、系列號(hào)、購(gòu)進(jìn)日期、購(gòu)進(jìn)發(fā)票、使用記錄（使用日期、使用人、使用目的、使用情況）、維護(hù)保養(yǎng)記錄（老化時(shí)間、老化人、故障現(xiàn)象、故障原因、處理方法、處理結(jié)果及附圖）等，并以檔案盒形式保存，最好做到專(zhuān)柱專(zhuān)用。1.3.5常用液相色譜柱主要應(yīng)用范圍與特點(diǎn)匯總1.3.5.1反相色譜柱柱填料類(lèi)型主要應(yīng)用范
6、圍特點(diǎn)C18（ODS）可分離多種化合物，最適合用于極性樣品或做離子抑制的樣品的分析普適性好；保留性強(qiáng)，用途廣；可用于正相。C8（辛基）與C18相似與C18相似，但保留值稍小C3，C4多用于肽類(lèi)與蛋白質(zhì)保留值更小C1[三甲基單氯硅烷(TMS)]普通反相溶劑分析疏水性強(qiáng)的化合物；使用高水含量溶劑分析高極性化合物；分離多功能團(tuán)化合物保留值最??；最不穩(wěn)定；可用于反相與正相苯基，苯乙基多用于分離分析同時(shí)含極性和非極性芳香化合物的混合物保留值適中；選擇性有所不同，對(duì)極性芳香化合物選擇性更強(qiáng)；可用于正相。1.3.5.2正相色譜柱柱填料類(lèi)型主要應(yīng)用范圍特點(diǎn)CN（氰基）適用于
7、在ODS上無(wú)保留或分離時(shí)間太長(zhǎng)的組分的分離，以及樣品中同時(shí)含有親水與疏水性化合物而在ODS上色譜優(yōu)化困難的場(chǎng)合，也可用于氨基酸分析。屬中等級(jí)性柱，普適性好；保留適中，可用于正相與反相。NH2（氨基）主要用于分析單糖類(lèi)、烴類(lèi)化合物保留性弱；極性大，不穩(wěn)定，酸性條件下易水解；亦可用于反相。OH（二醇基，DIOL）多用于有機(jī)酸、肽類(lèi)與蛋白質(zhì)分析極性大于CN，小于NH2，常做HILIC用?？煞聪嘤?。高純硅膠柱多用于制備LC，適用于多種化合物普適性好；價(jià)廉；操作不太方便；pH窄（2-7.5）；次級(jí)保留效應(yīng)強(qiáng)（硅羥基），易峰拖尾或前延，分叉等。1.3.5.3聚合物基質(zhì)柱
8、（eg.聚苯乙烯柱）單獨(dú)的聚苯乙烯類(lèi)填料柱主要用于分
