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《標(biāo)準(zhǔn)菌種管理規(guī)程.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、標(biāo)準(zhǔn)菌種管理規(guī)程目的：規(guī)范藥品微生物學(xué)檢定用菌的管理，最大限度降低變異率，確保菌種的溯源性與穩(wěn)定性，從而確保微生物學(xué)檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。職責(zé)：QC主管負(fù)責(zé)菌種的申購、接受、保存、分發(fā)，微生物檢驗員負(fù)責(zé)菌種的確認(rèn)、傳代、使用及銷毀。范圍：本規(guī)程適用于檢定用菌種的管理，包括菌種的申購、保存、傳代、使用及銷毀等。內(nèi)容：1術(shù)語標(biāo)準(zhǔn)菌種是指由中國藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心提供的冷凍干燥菌。傳代用菌種是指用標(biāo)準(zhǔn)菌種制備的采用特定保存方法長期固定保存的菌種，用于傳代及制備工作用菌種。工作用菌種是指用標(biāo)準(zhǔn)菌種或傳代用菌種接種至普通瓊脂斜面培養(yǎng)后，
2、作為日常工作使用的菌種。菌種的代是指將其接種至一新鮮培養(yǎng)基上或培養(yǎng)基內(nèi)，每萌發(fā)一次即稱為一代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代。2.標(biāo)準(zhǔn)：2.1檢定菌的申購QC主管每年根據(jù)檢定菌種的使用情況（包括臨時檢驗需要），提出購買計劃，交由質(zhì)量管理部部長審批后，向中檢所菌種保藏中心或?。ㄊ校┧帣z所購買凍干菌種（標(biāo)準(zhǔn)菌種）；也可以直接向?。ㄊ校┧帣z所購買傳代用菌種，購買時，需詢問與確定菌種的代數(shù)，以便傳代時控制代數(shù)。2.2檢定菌的接收菌種到達(dá)實驗室后，由QC主管接收菌種，檢查其名稱和數(shù)量，以及每一支的完整性，同時將菌種的所有信息，填寫在《檢定菌接收記錄
3、》（附表1）上，內(nèi)容包括：名稱、數(shù)量、編號（無編號者按檢定菌種的編號原則編號）、代數(shù)、來源、接收日期、接收人等，貼好標(biāo)簽并儲存于2-8?C直到需要使用時。儲存期最長不超過5年。2.3檢定菌的保存2.3.1工作用菌種的保存工作用菌種采用斜面低溫保存法。將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌生長充分以后，轉(zhuǎn)移至2～8℃冰箱中保存。此法僅用于工作用菌種的短期保存，并應(yīng)隨時檢查其污染雜菌和變異等情況，發(fā)現(xiàn)異常情況，經(jīng)應(yīng)滅活處理后銷毀。保存時間根據(jù)菌種種類而不同，細(xì)菌：1個月；酵母菌：2個月；霉菌及芽胞：3個月。2.3.2傳代用菌種的保存采用甘油冷凍管保藏
4、法或液體石蠟保存法。2.3.2.1．甘油冷凍管保存法用無菌接種環(huán)輕輕刮取經(jīng)冷凍復(fù)溶增菌后并接種至平板或瓊脂斜面的菌苔，并通過接種環(huán)與試管壁之間的輕輕摩擦而使細(xì)菌充分?jǐn)U散到預(yù)先裝入試管中的無菌純化水中，調(diào)整菌液濃度，使其等同于10號比濁管，向已制備好的菌懸液中加入等體積的無菌甘油（濃度20%），即為10%甘油菌懸液，輕輕振搖，使內(nèi)容物充分混合，分裝于無菌小試管，在-20℃冷凍條件下保存。此甘油冷凍管為第2代（G2），保存期限為5年。使用時，取出一支放至室溫，轉(zhuǎn)種增菌培養(yǎng)或接種至瓊脂斜面復(fù)蘇，挑取純菌落傳代或工作用。此種方法主要適用于需氧細(xì)菌和酵母菌的
5、保藏（如大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副傷寒沙門菌）。2.3.2.2．液體石蠟保存法2.3.2.2.1．無菌液體石蠟的制備：選用優(yōu)質(zhì)化學(xué)純液體石蠟，將液體石蠟分裝加塞，用牛皮紙包好，在121℃滅菌30分鐘,置40℃恒溫箱中蒸發(fā)水分，經(jīng)無菌檢查后備用。2.3.2.2.2．液體石蠟管的制備：將菌種穿刺接種于半固體高層培養(yǎng)基中，在適宜條件下培養(yǎng)結(jié)束后，在層流臺下用無菌吸管吸取上述無菌液體石蠟至培養(yǎng)好的菌種管內(nèi)，并使石蠟高出菌種表面約1cm使菌體與空氣隔絕，并將試管直立，置于-20℃冷凍冰箱中保存。此法主要適用于霉菌、厭氧菌、放線菌、芽孢桿菌的保存（如枯
6、草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等）。2.3.3．各菌種的保存方法、條件及期限，見《傳代用菌種保存方法、保存溫度、保存期限》（附件1）。2.4．檢定菌的傳代檢定菌菌種的傳代因凍干菌（標(biāo)準(zhǔn)菌種）與傳代用菌種而不完全相同。2.4.1．標(biāo)準(zhǔn)菌種的復(fù)蘇、確認(rèn)、傳代2.4.1.1．標(biāo)準(zhǔn)菌種的復(fù)蘇2.4.1.1.1．把凍干菌種管、滅菌毛細(xì)滴管（1ml）、雙碟、鑷子、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（或其它適宜培養(yǎng)基）數(shù)支，移入接種室或超凈工作臺。2.4.1.1.2．將凍干菌種管外壁用碘酒擦洗消毒，稍干，用75%乙醇棉擦凈，放在滅菌雙碟內(nèi)，待干。點燃酒精燈，將標(biāo)準(zhǔn)菌種管的封口一端
7、在火焰上，燒灼紅熱，用滅菌毛細(xì)滴管吸取營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（或其它適宜的培養(yǎng)基），滴在灼熱的菌種管封口一端，使驟冷而炸裂。2.4.1.1.3．取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開，放入滅菌雙碟內(nèi)，另取1支滅菌毛細(xì)滴管，在火焰旁吸取營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（或其它適宜的培養(yǎng)基）少許，加至菌種管底部，將凍干菌塊攪動促使溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液，接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（或其它適宜的培養(yǎng)基）內(nèi)，并根據(jù)不同菌種類型而將其培養(yǎng)于相宜的溫度下24～72小時（細(xì)菌需要24～48的培養(yǎng)物，酵母菌需要72小時的培養(yǎng)物，形成孢子的微生物則宜保藏孢子，放線菌和絲狀真菌則應(yīng)培養(yǎng)7～10天）。
8、最后將毛細(xì)滴管及菌種管經(jīng)高溫滅菌（121℃，45分鐘）。2.4.1.1.4．取出培養(yǎng)物，仔細(xì)觀察液體培養(yǎng)基是否渾濁，渾濁說
