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1、魚藤酮對(duì)PC12細(xì)胞Caspase【關(guān)鍵詞】帕金森病EffectofrotenoneonCaspase3,FasandFaslandrelationshipetry.1.0μmol/LrotenoneediumatdifferenttimesandtheproteinexpressionofCaspase3andFas/Faslorphologicalchangesofapoptosisittingelectronmicroscopy(TEM).RESULTS:Theratioofapoptos
2、isincontrolgroupthatincontrolgroup(P<0.02).The1.0μmol/Lrotenonehadmarkedeffect(P<0.01).oothmembrane,decreasedcellularprotruding,smallratioofnucleus/cytoplasm,increasedspaceincytoplasm,increasedgapofperipheryinnucleusuncertainly,andincreasedpoik
3、ilochromatincollectedinedge.CONCLUSION:RotenonemaydamagethePC12cellsbyactivationofCaspase3andFas/Faslapoptosispathicroscopy,electron 【摘要】目的：探討魚藤酮對(duì)PC12細(xì)胞Caspase3,Fas和Fasl的作用及與凋亡的關(guān)系.方法：應(yīng)用流式細(xì)胞儀(floetry,FCM)檢測(cè)不同濃度魚藤酮對(duì)體外培養(yǎng)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤（PC12）細(xì)胞株凋亡率的影響，并檢測(cè)1.0
4、μmol/L魚藤酮干預(yù)不同時(shí)段對(duì)Caspase3、Fas/Fasl蛋白表達(dá)的影響，透射電鏡觀察凋亡形態(tài)學(xué)的改變.結(jié)果：對(duì)照組凋亡率為0.0199±0.0020，經(jīng)0.1,1.0,2.0和3.0μmol/L不同濃度魚藤酮干預(yù)2d，凋亡率明顯增加其變換值分別為：0.0305±0.0030,0.0486±0.0073,0.0313±0.0041和0.0285±0.0031，與對(duì)照組比較有顯著差別(P<0.02),實(shí)驗(yàn)組中以1.0μmol/L作用最顯著(P<0.01)，當(dāng)魚藤酮濃度大于1.0
5、μmol/L時(shí)，其作用呈劑量依賴性遞減.對(duì)照組Caspase3,Fas和FaslFI值分別為1.0±0.03,1.0±0.02和1.0±0.04；經(jīng)魚藤酮干預(yù)3,6,12,24和48h，各組均有Caspase3,Fas和Fasl表達(dá)，其中以魚藤酮干預(yù)6h時(shí)Fas/Fasl表達(dá)最明顯(P<0.01)，而12h時(shí)Caspase3表達(dá)最明顯(P<0.01).電鏡下觀察到細(xì)胞膜不光滑,細(xì)胞突起減少，核質(zhì)比小，細(xì)胞質(zhì)空間增大，核周隙增大、不規(guī)則，異染色質(zhì)增多、邊集.結(jié)論：魚藤酮可通過(guò)激活Cas
6、pase3,Fas/Fasl凋亡途徑損傷PC12細(xì)胞. 【關(guān)鍵詞】 魚藤酮；細(xì)胞凋亡；帕金森?。伙@微鏡檢查，電子 0引言 帕金森病(Parkinsonsdisease,PD)是嚴(yán)重威脅人類生存的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，臨床癥狀主要表現(xiàn)為：靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肢體僵、姿勢(shì)平衡障礙以及植物神經(jīng)癥狀，病情呈進(jìn)行性加重，這嚴(yán)重限制了患者的活動(dòng)能力，影響了患者的生活質(zhì)量，不僅給患者造成了極大的痛苦，也給家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān).此外，PD的神經(jīng)病理學(xué)特征主要表現(xiàn)為黑質(zhì)致密區(qū)選擇性多巴胺能神經(jīng)元變性和
7、進(jìn)行性脫失，部分存活的神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)lea,美國(guó))；魚藤酮(華美公司，中國(guó))；谷氨酰胺，tritonX100,PI,枸櫞酸鈉和RNA酶(Sigma,美國(guó))；Fas抗體，F(xiàn)asl抗體，Caspase3抗體，F(xiàn)ITC熒光素抗體(Scbt公司，美國(guó))；500g/L戊二醛(天津四通化工廠). 1.2方法 1.2.1PC12細(xì)胞培養(yǎng)將PC12細(xì)胞株懸浮于DMEM培養(yǎng)基（含100mL/L滅活馬血清，50mL/L滅活胎牛血清，2mmol/L谷氨酰胺，100ku/L青霉素，100mg/L卡那霉素）中，以5×1
8、08/L接種到預(yù)先涂上多聚賴氨酸的75cm2培養(yǎng)瓶中，置于37℃、含50mL/LCO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中孵育，48h換液,用于以下實(shí)驗(yàn). 1.2.2流式細(xì)胞儀檢測(cè)魚藤酮對(duì)PC12細(xì)胞凋亡率的影響將細(xì)胞以5×108/L分別傳入25cm2培養(yǎng)瓶，分別設(shè)1個(gè)對(duì)照組、4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，對(duì)照組換新鮮培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組加入魚藤酮使其終濃度分別為:0.1,1.0,2.0和3.0μmol/L,孵育24h，收集細(xì)胞，PBS洗2遍，預(yù)冷的700mL/L乙醇4℃固定備用，準(zhǔn)備流式細(xì)胞儀測(cè)定樣品：①10
