雙特異性抗體與抗體融合蛋白

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1、雙特異性抗體及其多特異性抗體2雙特異性抗體概述構(gòu)建策略應(yīng)用3概述雙特異性抗體：具有兩種抗原結(jié)合特性的抗體。抗體兩個(gè)結(jié)合點(diǎn)表現(xiàn)為不同的特異性，即分別結(jié)合不同表位。既結(jié)構(gòu)上雙價(jià)、功能上雙價(jià)。如，一個(gè)結(jié)合靶細(xì)胞（如腫瘤細(xì)胞），另一結(jié)合藥物或免疫效應(yīng)細(xì)胞（如蓖麻毒素、抗癌藥物、細(xì)胞毒性細(xì)胞）4雙特異性抗體5雙特異性抗體的靶標(biāo)一個(gè)結(jié)合治療靶標(biāo)，另一個(gè)指向體內(nèi)效應(yīng)細(xì)胞T細(xì)胞TCRCD3CD2吞噬細(xì)胞/APCFcγR、CRNK細(xì)胞FcγR、CD566雙特異性抗體的功用：可在較低的抗體濃度下促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的溶解或殺傷。表達(dá)相對(duì)低水平的腫瘤相關(guān)抗原也足以誘發(fā)雙特異性抗體對(duì)靶細(xì)胞的溶解和殺傷。TNF-α和I

2、FN-γ可以進(jìn)一步活化其他抗腫瘤的效應(yīng)細(xì)胞如NK等，并可以產(chǎn)生一系列繼發(fā)的作用。雙特異性抗體與CTL結(jié)合后可誘導(dǎo)靜止?fàn)顟B(tài)的T細(xì)胞增殖，增強(qiáng)IL-2誘導(dǎo)淋巴因子釋放及T細(xì)胞毒性71983年，Milstein等在單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步擴(kuò)展雜交瘤技術(shù)，用細(xì)胞工程法制備出雙特異性單克隆抗體(BsMAb)，即將兩株各自分泌不同特異性性單抗的雜交瘤細(xì)胞再融合得到四源雜交瘤，或?qū)⒁恢觌s交瘤細(xì)胞與免疫脾細(xì)胞融合得到的三源雜交瘤，即可獲得同時(shí)具有兩種親代單抗特異性BsMAb8雜化雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的雙特異性抗體9雜化雜交瘤分泌的抗體形式保持原特異性抗體分子：L1H1-H1L1，L2H2-H2L2重鏈

3、特異性相同的配對(duì)抗體分子：L1H1-H1L2，L1H2-H2L1L2H1-H1L2，L1H2-H2L2重鏈、輕鏈特異性不同的配對(duì)抗體分子：L1H1-H2L2，L1H2-H1L2L1H1-H2L1，L2H2-H1L210只有L1H1-H2L2才是所需的雙特異性抗體11雜化雜交瘤方法的不足產(chǎn)量低，僅占10%產(chǎn)物需篩選，費(fèi)時(shí)費(fèi)力瘤株不穩(wěn)定12構(gòu)建策略雙特異性抗體的構(gòu)建方法基因工程技術(shù)迄今為止，已有多種基因工程雙特異性抗體構(gòu)建成功，多為小分子抗體。單鏈抗體（ScFv）是構(gòu)建雙特異性抗體的理想元件。構(gòu)建基因工程雙特異性抗體有多種方式，常見(jiàn)有四種構(gòu)建形式，13末端半胱氨酸殘基（Cys）共價(jià)交聯(lián)在兩

4、種scFv分子C末端分別帶上自由的Cys，通過(guò)常規(guī)二硫鍵共價(jià)交聯(lián)，形成雙特異性抗體VLAVHALCysVLBVHBLCys-S-S-14鏈間連接肽（intralinker）相連將兩種scFv分子基因用intralinker連接在一起，然后表達(dá)形成雙特異性抗體VLAVHALVLBVHBLL15雙體型雙特異性抗體將兩種不同抗體的VH和VL用較短的linker連接形成兩種不同單鏈，當(dāng)它們共表達(dá)時(shí)，其相互間連接在一起，形成雙特異性抗體1993，Holliger16微型雙特異性抗體利用專門(mén)二聚化結(jié)構(gòu)將兩種scFv分子連接在一起，形成雙特異性抗體如利用fos和jun基因的亮氨酸拉鏈序列：VLAVH

5、ALfosVLBVHBLjun1718雙特異性抗體的應(yīng)用免疫診斷臨床檢測(cè)甲胎蛋白、檢測(cè)癌胚抗原腫瘤放射顯影一端針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面抗原，一端針對(duì)半抗原螯合劑。后者可以與帶放射性核素的半抗原結(jié)合。腫瘤藥物殺傷將單克隆抗體與化療藥物、毒素或放射性核素偶聯(lián)腫瘤的免疫殺傷乳腺癌、淋巴母細(xì)胞白血病、神經(jīng)膠質(zhì)瘤多特異性抗體的構(gòu)建多特異性抗體由于分子量較大，構(gòu)建過(guò)程相對(duì)復(fù)雜，所以成功的報(bào)道不多見(jiàn)，主要是采用基因工程方法構(gòu)建的單鏈三特異性抗體，方法同用鏈間連接肽構(gòu)建雙特異性抗體一樣。此外，采用縮短ScFv鏈內(nèi)連接肽的長(zhǎng)度至三個(gè)氨基酸殘基以下，這樣的四條單鏈分子就有可能兩兩配對(duì)形成四體分子。1920謝謝！1

6、、雙特異性抗體：具有兩種抗原結(jié)合特性的抗體?？贵w兩個(gè)結(jié)合點(diǎn)表現(xiàn)為不同的特異性，即分別結(jié)合不同表位。既結(jié)構(gòu)上雙價(jià)、功能上雙價(jià)。2、制備雙特異性抗體常見(jiàn)的方法有哪些？末端半胱氨酸殘基（Cys）共價(jià)交聯(lián)：在兩種scFv分子C末端分別帶上自由的Cys，通過(guò)常規(guī)二硫鍵共價(jià)交聯(lián)，形成雙特異性抗體鏈間連接肽（intralinker）相連：將兩種scFv分子基因用intralinker連接在一起，然后表達(dá)形成雙特異性抗體雙體型雙特異性抗體:將兩種不同抗體的VH和VL用較短的linker連接形成兩種不同單鏈，當(dāng)它們共表達(dá)時(shí)，其相互間連接在一起，形成雙特異性抗體微型雙特異性抗體:利用專門(mén)二聚化結(jié)構(gòu)將兩種s

7、cFv分子連接在一起，形成雙特異性抗體，如利用fos和jun基因的亮氨酸拉鏈序列.3、雙特異性抗體的應(yīng)用有哪些？免疫診斷臨床檢測(cè)甲胎蛋白、檢測(cè)癌胚抗原腫瘤放射顯影一端針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面抗原，一端針對(duì)半抗原螯合劑。后者可以與帶放射性核素的半抗原結(jié)合。腫瘤藥物殺傷將單克隆抗體與化療藥物、毒素或放射性核素偶聯(lián)腫瘤的免疫殺傷乳腺癌、淋巴母細(xì)胞白血病、神經(jīng)膠質(zhì)瘤214、末端半胱氨酸殘基（Cys）共價(jià)交聯(lián)制備雙特異性抗體的原理：在兩種scFv分子C末端分別帶