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《丹紅注射液對睡眠剝奪大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響 》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、丹紅注射液對睡眠剝奪大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響睡眠剝奪(sleepdeprivation,SD)是一種特殊的生理心理狀態(tài)，可引起機(jī)體認(rèn)知功能、情緒、行為及免疫功能等一系列改變[1]。既往有研究表明[2]，SD可影響動物的學(xué)習(xí)記憶能力。在戰(zhàn)爭環(huán)境下或特殊職業(yè)里，SD是不可避免的。因此，為了保證作業(yè)人員的安全與健康，保證作戰(zhàn)和特殊職業(yè)工作的需要，探討減少SD對機(jī)體影響的措施具有十分重要的意義。我們著眼于中藥領(lǐng)域，采用動物行為學(xué)的方法，試圖去了解丹紅注射液(Danhonginjection)對SD的對抗作用，并檢測海馬中膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GlialFi
2、briliaryAcidicProtein，GFAP)的表達(dá)規(guī)律，以期闡明其可能機(jī)制。 1材料和方法 1.1動物及分組成年、健康)時，由于骨骼肌的松弛使大鼠掉入水中而驚醒，如此反復(fù)多次造成REM的剝奪。在大鼠活動空間內(nèi)給予12h/12h明暗交替，室內(nèi)溫度控制在18~22℃?！ ?.3水迷宮組成Morris水迷宮由北京碩林苑公司生產(chǎn)。包括一直徑150cm、高60cm的圓形不銹鋼水池，內(nèi)壁黑色，置有直徑15cm、高25cm的透明有機(jī)玻璃平臺，以及水迷宮測試系統(tǒng)。實驗時，平臺隱藏在水下2cm，水溫保持在(22±0.5)℃。池壁上標(biāo)有東南西北
3、4個入水點，它們將水池劃分為4個象限，在任意一象限區(qū)中間放置平臺，平臺沒于水下2cm。水池周圍圍有窗簾盡量消除外界影響，池壁水面上貼有不同顏色不同形狀紙片。在實驗過程中，保持環(huán)境安靜。大學(xué)生論文發(fā)表 1.4行為實驗實驗分為定位航行試驗和空間探索試驗兩個部分?！ ?.4.1定位航行實驗(placenavigationtest，PNT)每天08：00~11：00之間對每只大鼠進(jìn)行訓(xùn)練，不選平臺所在象限作為入水點，按順時針方向把大鼠面向池壁放入水中，檢測大鼠隱匿平臺潛伏期。如果在規(guī)定的最長時間120s內(nèi)未到達(dá)平臺，則由實驗者將其引至平臺，逃避
4、潛伏期記為120s，大鼠在平臺休息20s后進(jìn)行下1次測試。觀察并記錄動物找到并爬上平臺的潛伏期、游泳路程及游泳軌跡。3d訓(xùn)練結(jié)束后將大鼠按組別放入睡眠剝奪箱。SD時間點到后進(jìn)行最后1次PNT，記錄平均潛伏期、平均游泳路程作為該只大鼠所得成績?！ ?.4.2空間探索實驗(spatialprobetest，SPT)各組大鼠最后1次PNT后撤除平臺，將大鼠從最后1次入水點面向池壁放入水中，使大鼠在水迷宮中連續(xù)游泳，記錄大鼠120s內(nèi)穿越原平臺平面的次數(shù)?！ ?.5海馬GFAP的測定各組大鼠最后1次水迷宮測試完后，在10%水合氯醛麻醉下用0.9%
5、生理鹽水200ml經(jīng)心臟快速灌注沖洗，再用4%多聚甲醛(用0.1MPB配制，pH7.2~4.4)200ml灌注取腦后固定。包埋，定位海馬，冠狀面切片，片厚3μm;抗原熱修復(fù)后依次加入3%H2O2、10%山羊血清封閉液，各在37℃溫箱孵育10min，加入1∶100GFAP抗體，于4℃冰箱過夜，滴加二抗工作液及辣根酶，DAB顯色，光鏡下觀察胞質(zhì)呈棕黃色為陽性細(xì)胞。對照組染色步驟相同，陰性對照用PBS代替一抗?！ ?.6數(shù)據(jù)處理切片在統(tǒng)一放大倍數(shù)(10×40)下隨機(jī)選5個視野，輸入圖像分析系統(tǒng)，以光密度值(Opticaldensity)表示GF
6、AP的含量，計算其均值。實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計，進(jìn)行單因素方差分析和組間t檢驗?！ ?結(jié)果 2.1睡眠剝奪大鼠Morris水迷宮測試各組大鼠SD后Morris水迷宮測試游泳潛伏期及路程均延長，實驗組和對照組不同SD時間之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)，穿越平臺次數(shù)下降不明顯(P>0.05)。與對照組相比，實驗組2，3d及5d組潛伏期縮短(P<0.05)，4d組潛伏期縮短(P<0.01);實驗組2d及5d組游泳路程縮短(P<0.05)，3d及4d組游泳路程縮短(P<0.01);實驗組
7、及對照組之間，穿越平臺次數(shù)無明顯變化(P>0.05)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(表1～3及圖1~3)。表1睡眠剝奪大鼠Morris水迷宮測試潛伏期比較圖1睡眠剝奪大鼠Morris水迷宮測試潛伏期比較表2睡眠剝奪大鼠Morris水迷宮測試路程比較 2.2睡眠剝奪大鼠海馬組織GFAP的檢測各組大鼠SD后海馬中GFAP含量均增高，實驗組和對照組不同SD時間之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)，形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為海馬區(qū)GFAP陽性細(xì)胞增多，胞體變大，突起增粗增長。與對照組相比，實驗組2d及3d組GFAP含量增高(P<0.05)，4d及5d組G
8、FAP含量增高(P<0.01)，實驗組和對照組之間有統(tǒng)計學(xué)差異(表4及圖4)。3討論 小平臺水環(huán)境法(“flol/kg為給藥劑量，給藥1次/d，連續(xù)給藥7d，給藥完畢即進(jìn)行SD。圖2睡
