實驗四 大黃中蒽醌類成分的提取分離和鑒定

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1、實驗四大黃中游離蒽醌類成分的提取、分離與鑒定一、概述植物來源：大黃系蓼科植物掌葉大黃(RheumpalmatumL．)、唐古特大黃(RheumtanguticumMaxim.exBalf．)或藥用大黃(RheumoffcinaleBaill．)的干燥根及根莖。大黃記載于《神農本草經》等許多文獻中，具有瀉下、健胃、清熱解毒等功效。自古以來，大黃在植物性瀉下藥中占有重要位置，是一味很早就被各國藥典收載的世界性藥材。功效：大黃具有多方面的生物活性，其抗菌、抗感染及抗腫瘤活性有效成分主要為蒽醌類衍生物，如：大黃酸、大黃素和蘆薈大黃素；止血的主要有效成

2、分為大黃酚；瀉下的有效成分是結合型的蒽苷類。蒽醌類衍生物占大黃總化學成分的3％～5％，該類成分少部分以游離狀態(tài)存在，大部分與葡萄糖結合成苷的形式存在。此外，大黃還含有鞣質等多元酚類化合物，含量在10％一30％之間，具止瀉作用，與蒽苷的瀉下作用恰恰相反。主要化學成分的結構及物理性質大黃中含有多種游離的羥基蒽醌及其與糖所形成的苷類化合物，已知的游離羥基蒽醌主要有以下5種化合物。大黃酸(rhein)，C15H806，黃色針晶，m.p321—322℃(330℃分解)，UVλmax431，258，231，204?？扇苡趬A水，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、乙

3、醚和石油醚，不溶于水。大黃素(emodin)，C15H1005，橙黃色針晶(乙醇)，m.p256—257℃。UVλmax436，289，266，253，222?？扇苡趬A水，微溶于乙醚、三氯甲烷，不溶于水。蘆薈大黃素(aloeemodin)，橙色針晶(甲苯)，m.p223～224℃。UVλmax429，287，254，225，202?？扇苡谝颐?、苯及堿水，不溶于水。大黃素甲醚(physcion)，磚紅色單斜針狀結晶(苯)，m.p205—207℃。溶于苯、三氯甲烷及甲苯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮，不溶于水。大黃酚(chrysophano1)，

4、C15H1004，橙黃色針晶(乙醇或苯)，m.p195—196℃。UVλmax429，287，256，225，202?？扇苡诒?、三氯甲烷、苯、乙醚和冰醋酸和堿水，微溶于石油醚，不溶于水。大黃酸葡萄糖苷(rhein8-monoglucoside)，黃色針晶。m.p266—267℃。大黃素葡萄糖苷(emodinmonoglucoside)，橙色針晶(甲苯)。m.p190—191℃。蘆薈大黃素葡萄糖苷(aloeemodinmonoglucoside)，黃色針晶。m.p235℃。大黃酚葡萄糖苷(chrysophanolmonoglucoside)，

5、橙色針晶(甲苯)。m.p239℃。二、實驗部分(一)實驗目的要求1．掌握蒽醌苷元的提取方法—雙相酸水解法。2．掌握梯度PH萃取法提取分離大黃中各種蒽醌苷元的原理及操作方法。3．掌握羥基蒽醌類化合物的顏色反應及薄層色譜鑒別方法。(二)實驗的基本原理1．提取原理雙相酸水解法，為一相為與酸水不相互溶的有機溶劑，另一相為酸水，加熱回流水解的方法。由于大黃中的羥基蒽醌類化合物多以苷的形式存在，所以首先要將苷水解成苷元，本實驗選用硫酸和乙酸乙酯作為雙相酸水解的溶劑，采用加熱回流方法，提取大黃藥材中的游離蒽醌類化合物。根據苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯

6、等親脂性有機溶劑的性質，即在加熱回流提取過程中，稀硫酸可將蒽醌苷水解成苷元，游離出來的蒽醌苷元隨即溶于乙酸乙酯中，從而將蒽醌苷元提取出來。2．分離原理pH梯度萃取法羥基蒽醌類化合物酸性強弱不同，用pH梯度法進行分離。具有羧基或多個β位酚羥基的蒽醌可溶于5％碳酸氫鈉溶液；具有一個β位酚羥基的蒽醌可溶于5％碳酸鈉溶液，只具有α位酚羥基的蒽醌，酸性弱，只溶于氫氧化鈉溶液。以分離酸度不同的蒽醌苷元。也可利用游離蒽醌的極性不同，采用硅膠柱色譜法進行分離(1)大黃中游離蒽醌的酸性強弱順序大黃酸(—COOH)>大黃素(β酚—OH)>蘆薈大黃素(醇—OH)>

7、大黃素甲醚(—OCH3)≈大黃酚(—CH3)。(2)大黃中游離蒽醌的極性大小順序大黃酸>大黃素>蘆薈大黃素>大黃素甲醚>大黃酚。大黃酚和大黃素甲醚酸性相近，但極性不同，可用硅膠柱色譜法進行分離。(三)實驗方法1．總蒽醌苷元的提取、分離工藝流程操作注意事項①所得乙酸乙酯液中若帶有酸水液，應用分液漏斗分出棄去；此處用蒸餾水洗除乙酸乙酯液中的酸。②萃取時容易發(fā)生乳化，而且隨著堿液堿度的增高，乳化現(xiàn)象會越嚴重，所以要輕輕振搖。③每次加堿液進行pH梯度萃取時，注意要測一下乙酸乙酯液的pH。④萃取時一定要注意乳化層的分出，不要混入。2．總蒽醌苷元的提取大

8、黃粗粉50g，置500ml燒瓶中，加20％硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2個h(加磁子攪拌)，放置，冷后過濾，殘渣棄去，乙酸乙酯提取液置分液漏