高效液相色譜使用詳細操作步驟

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1、高效液相色譜使用操作步驟一、泵操作面板PUMP：運行鍵START：梯度運行鍵PURGE：快沖鍵RESET：復位鍵HOLD：程序暫停鍵STOP：泵停止鍵TIME：程序開啟鍵FLOW：流速：RSVR：ABCPROG：程序DEL：刪除程序PMAX：最大壓力PMIN：最小壓力ENTER：確定TIME0FLOWENTER（設(shè)置流速）TIME0RSVRABCENTER（設(shè)置溶劑）TIME0PROGENTER（設(shè)置程序）TIME0%A30ENTER（設(shè)置比例）TIME0%B30ENTER（設(shè)置比例）TIME0%C40ENTER（設(shè)置比例）DELPROG1

2、ENTER（刪除程序）1.對于梯度泵設(shè)定舉例如下：(人參皂苷的梯度)TIME0PROG1ENTERTIME0%A81ENTERTIME15%A81ENTERTIME60%A65ENTERTIME65%A0ENTERTIME80%A0ENTERTIME81%A81ENTERTIME100%A81ENTER因為A+B之和始終是100%，所以B相就不用設(shè)了。7．對于對照品在這種條件下只要對照品的峰全部出完后按下RESET鍵等20分鐘即可進第二針進完針后按START鍵運行梯度程序。但是對樣品來說一定要等峰出完后再按下RESET鍵等基線基走直才可進下

3、一針。二、檢測器操作面板RESET：復位鍵A/Z：調(diào)零鍵WL：調(diào)波長ENTER：確定三、實驗前的準備工作1、實驗前流動相提前配好過濾脫氣。2、置換流動相時把泵的濾頭從原來的流動相中換到新的流動相中濾頭要輕拿輕放。3、液路排氣順序：首先打開排氣閥—按PURGE鍵進行排氣結(jié)束后—按STOP鍵停止—再擰緊排氣閥—按PUMP鍵讓泵運行。4、打開檢測器首先觀察右上角氘燈指示燈確認氘燈是否點亮，按WL鍵調(diào)好實驗波長后按A/Z鍵調(diào)零。5、打開電腦打開在線工站選擇對應的通道，輸入實驗信息、方法、包括采樣控制，積分和儀器條件，積分面積外標法測絕對含量歸一法相

4、對含量內(nèi)標法測絕對含量；后點數(shù)據(jù)采集，將電壓調(diào)到-20~20，時間調(diào)到0~30，點零點校正后再點查看基線，大約1個小時左右基線基本穩(wěn)定（就是基本成直線，因為檢測器打開后需要一定的穩(wěn)定時間，檢測器基本穩(wěn)定泵里面的流動相同時也就置換好了），就可以進樣了。6、進對照品：對照品配成溶液后要過濾再進樣等對照品的峰出來以后點停止采集輸入文件名后保存。（一般連進三針為準）7、進樣品：樣品配成溶液后要過濾再進樣等樣品的峰出來以后點停止采集輸入文件名后保存。8、進樣閥搬閥順序—搬到LOAD位置時進針—打完針后搬到INJECT位置進樣要求打針勻速輕快搬閥輕快每

5、次基本一樣，外標法進樣量是定量管的四—五倍。9、用以下公式算出樣品含量：C標/C樣=S標/S樣10、做校正曲線：打開離線——點打開——打開對照品的譜圖——點積分方法（選用面積外標法）——點組分表——點全選——輸入所需要對照品的峰名——點采用——點校正——點標準含量——輸入含量（可以是對照品的濃度也可以是百分數(shù)）——OK——點加入標樣——再次打開剛才打開的對照品的譜圖——校正完畢——點峰名看校正曲線圖——點輸出——取名保存。11、計算樣品的含量：打開離線-打開樣品的譜圖-點預覽——點加載——加載剛才對照品的校正曲線譜圖——即可得出樣品的含量四

6、、液相色譜儀注意事項：1、泵正常工作時，在流動相和流速不變的前提下柱壓應該是穩(wěn)定的，當然在換流動相時壓力變化是正常的，正常情況下如果柱壓升高基本上都是由色譜柱使用時間長引起的（只有更換色譜柱），如果正常情況下壓力突然降低有可能是（1）接頭處有漏液的地方，采取的方法是有濾紙檢查，如有漏液的地方用扳手擰緊即可。如果沒有漏液則可能是（2）白色的管子里面有氣泡從而導致流動相進不到泵里面去，采取的方法是排氣泡排氣時：先STOP停泵—打開排氣閥—按PURGE（快沖）鍵—等氣泡排完后先STOP停泵—擰緊排氣閥，其先后步驟不要搞反了。2、泵正常工作時最高壓

7、力最好不要超過200KG，所以打開泵以后可以將泵的最大壓力調(diào)到200KG，這樣如果壓力超過上限則會自動報警停機，流速最好不用超過1ML/MIN，如果使用時壓力超過200KG，建議將流速調(diào)低點以降低壓力（在色譜柱正常的情況下），如果是因為色譜柱長時間使用造成壓力升高則建議更換色譜柱（因為色譜屬于耗材長時間使用就需要更換，更換的主要依據(jù)色譜柱出峰不正?；蛘咧鶋毫^高）。3、泵正常工作時平均每15天左右向注油孔加潤滑油2~3滴。4、流動相里面如果有鹽或酸類，做完實驗后要先用95%二次蒸餾水與5%甲醇洗色譜柱40分鐘左右，然后用純甲醇洗30分鐘左右

8、才可以關(guān)機。第二天如果繼續(xù)做實驗流動相里面仍舊有鹽或酸類，最好先用95%二次蒸餾水與5%甲醇過度20分鐘，再用流動相。如果流動相里面只有甲醇，水，乙腈。做完實驗后就不用95%二次