菌種保存方法

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1、菌種保存方法　　學(xué)習(xí)與比較幾種菌種保藏的方法?！　∥⑸锞哂腥菀鬃儺惖奶匦裕虼?，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才能在一定的時間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力?！　〉蜏亍⒏稍锖透艚^空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據(jù)這三個因素而設(shè)計的?！　”２胤椒ù笾驴煞譃橐韵聨追N：　　1．傳代培養(yǎng)保藏法　　又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等，培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存?！　?．液體石蠟覆蓋保藏法　　是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)

2、物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用?！　?．載體保藏法　　是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛?！　?．寄主保藏法　　用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。　　5．冷凍保藏法　　可分低溫冰箱、干冰酒

3、精快速凍結(jié)和液氮等保藏法。　　6．冷凍干燥保藏法　　先使微生物在極低溫度下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分。　　有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對細(xì)胞的損害。保護(hù)性溶質(zhì)可通過氫和離子鍵對水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。保護(hù)劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等?！　〖?xì)菌、酵母菌，放線菌和霉菌；　　肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學(xué)純的液體石蠟，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黃土或紅土，冰塊、食鹽，干冰，95％酒精，10％鹽酸

4、，無水氯化鈣；　　滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培養(yǎng)皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管，40目與100目篩子，油紙，濾紙條，干燥器，真空泵，真空壓力表，噴燈，L形五通管，冰箱，低溫冰箱，液氮冷凍保藏器。　　下列各法可根據(jù)實驗室具體條件與需要選做。　　1．斜面低溫保藏法　　將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。　　保藏時間依微生物的種類而有不同，霉菌、放線菌及有芽孢的細(xì)菌保存2—4個月，移種一次。酵母菌兩個月，細(xì)菌最好每月移種一次?！　〈朔閷嶒炇液凸S菌種室常用的保藏法，優(yōu)點是操

5、作簡單，使用方便，不需特殊設(shè)備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點是容易變異，因為培養(yǎng)基的物理、化學(xué)特性不是嚴(yán)格恒定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機(jī)會亦較多。　　2．液體石蠟保藏法　　將液體石蠟分裝于三角燒瓶內(nèi)，塞上棉塞，并用牛皮紙包扎，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鐘，然后放在40℃溫箱中，使水汽蒸發(fā)掉，備用?！　⑿枰２氐木N，在最適宜的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得到健壯的菌體或孢子?！　∮脺缇芪缇囊后w石蠟，注入已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端

6、1cm為準(zhǔn)，使菌種與空氣隔絕?！　⒃嚬苤绷ⅲ玫蜏鼗蚴覝叵卤４?。　　此法實用而效果好。霉菌、放線菌、芽孢細(xì)菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般無芽孢細(xì)菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內(nèi)，亦可保藏3個月之久。此法的優(yōu)點是制作簡單，不需特殊設(shè)備，且不需經(jīng)常移種。缺點是保存時必須直立放置，所占位置較大，同時也不便攜帶。從液體石蠟下面取培養(yǎng)物移種后，接種環(huán)在火焰上燒灼時，培養(yǎng)物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應(yīng)特別注意?！　?．濾紙保藏法　　將濾紙剪成0．5×1．2cm的小條，裝入0．6×

7、8cm的安瓿管中，每管1—2張，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鐘?！　⑿枰４娴木N，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長?！　∪缇撝Ｈ?—2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液?！　∮脺缇囎幼园碴彻苋V紙條浸入菌懸液內(nèi)，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞?！　碴彻芊湃雰?nèi)有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干?！　⒚藁ㄈ牍軆?nèi)，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存于低溫下?！　⌒枰褂镁N，復(fù)活培養(yǎng)時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻

8、璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)?！　〖?xì)菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14—17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡便，不需要特殊設(shè)備?！　?．沙土保藏法　　取