淺談木犀草素對對乙酰氨基酚誘導的l02肝細胞損傷的保護作用

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1、淺談木犀草素對對乙酰氨基酚誘導的L02肝細胞損傷的保護作用木犀草素，多以糖苷的形式存在于多種植物中，這些植物以全葉青蘭、辣椒、野菊花、金銀花、紫蘇含量較高。具有鎮(zhèn)咳和祛痰作用。據(jù)最新研究，呼吸道癥狀咳嗽、咳痰、喘息，均與氣道慢性炎癥有關(guān)。如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、慢性咽炎、變應性鼻炎等引起咳嗽、咳痰、喘息，均被認為與局部的炎癥浸潤有關(guān)，炎癥的存在，使得氣道的免疫應答混亂，患者常出現(xiàn)氣道反應性增高?！　]探討木犀草素(luteolin，Lut)對對乙酰氨基酚(acetaminophen，APAP)誘導的L02肝細胞損傷的保護作用。CCK8法檢測Lut對L02細胞活性的影響;篩選APA

2、P誘導L02細胞損傷的濃度及作用時間;細胞形態(tài)學、CCK8實驗和流式細胞術(shù)檢測分析Lut對APAP誘導的L02細胞凋亡的影響;比色法檢測細胞上清液中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽(GSH)及超氧化物歧化酶(SOD)活性;RTPCR檢測凋亡相關(guān)基因Bax，Bcl2，caspase3的表達。結(jié)果顯示Lut在2.5～40μmol・L-1不影響L02細胞活性;12mmol・L-1APAP作用于L02細胞12h可用于建立肝細胞損傷模型。與模型組相比，Lut組細胞狀態(tài)明顯改善，胞體增大，貼壁能力恢復明顯;細胞凋亡率明顯下降;MDA含量顯著下降(P<0.05或P&

3、lt;0.01)，GSH和SOD活性顯著提高(P<0.05或P<0.01)，同時能夠上調(diào)Bcl2及下調(diào)Bax，caspase3mRNA的表達(P<0.05或P<0.01)。該實驗證明了Lut對APAP誘導的L02細胞損傷有保護作用，其機制可能與其減輕氧化應激反應和抑制細胞凋亡有關(guān)?！　關(guān)鍵詞]木犀草素;L02細胞;氧化應激;細胞凋亡;對乙酰氨基酚　　對乙酰氨基酚(acetaminophen，APAP)是一種常見的解熱鎮(zhèn)痛藥，APAP在治療劑量下安全，但過量使用會造成急性肝損傷[1]。APAP過量服用在許多國家已成為故意或意外死亡的原因之一[23]。目前，有證據(jù)證實

4、細胞內(nèi)氧化應激是APAP引起急性肝損傷的重要生物學機制之一[47]，因此，探討能夠有效預防或緩解APAP引起的急性肝損傷途徑具有積極的臨床意義?！　∧鞠菟?luteolin，Lut)屬于黃酮類化合物，主要存在于菊花、忍冬花、金銀花、紫蘇葉等植物中，近年研究表明木犀草素具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種作用[811]。本文通過預防性給藥，研究給藥后氧化應激損傷相關(guān)生理指標變化，探討Lut的細胞保護和抗凋亡作用，為對乙酰氨基酚肝損傷的防治提供進一步的實驗依據(jù)?！　∫?、材料　　1.1細胞正常人肝細胞株(L02)為本實驗室保存。用含10%胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基在37℃，5%CO2且飽

5、和濕度條件下進行常規(guī)培養(yǎng)。　　1.2藥品與試劑DMEM(高糖)培養(yǎng)基購自Hyclone公司;胎牛血清、胰蛋白酶、青霉素和鏈霉素均購自GIBCO公司;CellCountingKit8(CCK8)購自東仁化學科技(上海)有限公司;木犀草素(luteolin，Lut)、五味子乙素(schizandrinB，SchB)均購自成都普菲德生物技術(shù)有限公司;APAP購自中國食品藥品檢定研究院;AnnexinVFITC/PI試劑盒購自Sigma公司;谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所;逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應試劑盒購自ThermoFisherSc

6、ienfitic公司;Bax，Bcl2，caspase3引物均購自Invitrogen公司?！　?.3儀器酶標儀(BioTekSynergyH1H1MFD，美國);DMILHC型倒置相差顯微鏡(Leica，德國);流式細胞儀(BDFACSCantoⅡ)。　　二、方法　　2.1細胞培養(yǎng)L02細胞培養(yǎng)按照常規(guī)培養(yǎng)的方法，含10%胎牛血清、100kU・L-1青霉素和100g・L-1鏈霉素的DMEM(高糖)培養(yǎng)基，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)?！　?.2CCK8檢測Lut對L02細胞活性的影響將L02細胞以7104個/mL接種于96孔板，每孔100μL，接種12h

7、細胞全部貼壁后，分別給予0，2.5，5，10，20，40，80，160μmol・L-1的Lut，實驗設(shè)陰性對照孔和空白對照孔，每個濃度設(shè)3個復孔。在37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8h后CCK8檢測L02細胞的存活率。實驗重復3遍。細胞存活率=(As-Ab)/(Ac-Ab)100%，式中Ac為對照孔吸光度，As為實驗孔吸光度，Ab為空白孔吸光度?！　?.3APAP誘導L02細胞肝損傷模型的建立將濃度為