地塞米松誘導小鼠腭裂動物模型的建立

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1、地塞米松誘導小鼠腭裂動物模型的建立劉賢齊志麗劉楊田悅明王浩宇吳靖芳鄭慧娥任君旭安峰【摘要】目的：探討地塞米松誘導小鼠腭裂動物模型的建立方法。方法：采用一次性腹腔注射地塞米松的方法，建立腭裂模型鼠。取孕12.5d、13.5d、14.5d、15.5d、16.5d胚胎頭部，石蠟包埋，6μm切片，HE染色，觀察腭發(fā)育過程腭突的變化。結果：妊娠第11.5d一次性給予地塞米松(Dex)1mL(用量為50mg/Kg)可誘發(fā)小鼠產生腭裂。模型組腭突體積瘦小，不能在中線區(qū)接觸融合，以致不能與腭突上方的鼻中隔接觸融合，胎鼠出現(xiàn)腭裂。結論

2、：妊娠第11.5d一次性給予小鼠足量地塞米松，可成功建立腭裂動物模型。為研究腭裂形成原因及分子機制提供了一個較好的模型?！娟P鍵詞】地塞米松；腭裂；模型/動物【ABSTRACT】Objective：Toinvestigatethemethodofconstructingthemodelofcleftpalateinducedbydexamethasone(DEX)．Methods：Thecleftpalatemouseembryomodelingmice．TheheadsofthemousesembryoGD12.5

3、toGD16.5,thenfixedbeddedbyparaffin,sectioned6μmandHEstained．Thechangesofpalatineprocessentcourseofcleft．Results:CleftpalateatGD11.5couldbeinducedbyinjectingDEXatthedoseof50mg/kgonce.Thepalatineprocessandanaslseptum,ergeeachother,allinthemodelgroupsoastodevelope

4、palatecleftontheembryo．Conclusion:InjectingenoughdoseDEXonceatGD11.5caninducethecleftpalatemouseembryomodelsuccessfully．Itisaperfectmodelforstudyingthereasonsandmechanismofcleftpalateforming．【KEYodels/Animal腭裂動物模型在腭裂病因學、形成機制及治療方法等研究中具有重要作用[1]。先天性腭裂的發(fā)生率約為0．1%，其發(fā)

5、生主要是由于早期發(fā)育過程中腭突融合障礙所致，通常是遺傳及環(huán)境因素相互作用的結果，其中妊娠早期誤服藥物也可能是其發(fā)生原因之一。在胚胎發(fā)育過程中腭的正常發(fā)育在很大程度上取決于環(huán)境因素，與腭裂發(fā)生有著密切的關系。胚胎腭器官發(fā)生期是器官的形成過程，同時又是胚胎的致畸敏感階段。本實驗擬通過對胚胎發(fā)育的漸進性形態(tài)學觀察，揭示腭發(fā)育及腭裂形成過程，從而建立腭裂動物模型。1材料與方法1．1實驗動物成年健康未生育昆明小鼠（體重為22～25g）（北京大學醫(yī)學部實驗動物中心），胎鼠為孕12.5d、13.5d、14.5d、15.5d、16.

6、5d（足月為19～21d）。1．2實驗材料試劑：醋酸地塞米松注射液（華北制藥集團）、PBS液（0．01M）、Bouins固定液、酒精、蘇木精伊紅染液、生理鹽水；儀器：OLYNPUSBX31，Motic6.0醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)和手術器械，如鑷子、解剖刀、解剖剪、止血鉗、注射器、培養(yǎng)皿。1．3模型的建立方法隨機選取健康、生活狀態(tài)相近的小鼠，雌雄按2∶1于晚18∶00合籠，并于次日早7：30檢查雌性小鼠的陰栓，查見陰栓之日定為孕0d（0GD），第11天14∶00定為孕11.5d（11.5GD）[2]。所有小鼠均自由飲水

7、及標準小鼠飼料喂養(yǎng)，孕鼠隨機分為模型組和對照組，每組各20只孕鼠。模型組孕鼠于妊娠第11.5d腹腔內注射50mg/Kg地塞米松，誘發(fā)胚胎腭裂畸形；對照組孕鼠于妊娠第11.5d腹腔內注射等量生理鹽水。各組孕鼠分別于12.5d、13.5d、14.5d、15.5d、16.5d以頸椎脫臼法處死，并立即于冰塊上操作，剖腹取出胎鼠。1．4取材方法取出胎鼠的方法：孕鼠處死后取仰臥位，立即放置于冰塊上固定，在小鼠腹中線最底部陰道口上方皮膚剪開“一”字形切口，然后向頭部作“U”形皮瓣，充分暴露腹腔器官。其中可見雙角子宮位于腹腔的兩側以

8、及帶有胎盤和羊膜的胚胎成串珠樣排列于子宮中，不同生長期的胎鼠體積大小不一。用剪子分離子宮與陰道相連的部位，取出胎鼠立即放至盛有冷PBS液（4℃，0.01MpH7.2～7.4）的培養(yǎng)皿中，并用鑷子剝離胎盤和羊膜，PBS洗滌，Bouin固定液24h，使固定液充分穿透組織。分離胎鼠頭部方法：由于胎鼠體積大小不一，12.5d、13.5d、14.5d的胚