地塞米松誘導(dǎo)小鼠腭裂動物模型的建立

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1、地塞米松誘導(dǎo)小鼠腭裂動物模型的建立作者：劉賢齊志麗劉楊田悅明王浩宇吳靖芳鄭慧娥任君旭安峰【摘要】目的：探討地塞米松誘導(dǎo)小鼠腭裂動物模型的建立方法。方法：采用一次性腹腔注射地塞米松的方法，建立腭裂模型鼠。取孕12.5d、13.5d、14.5d、15.5d、16.5d胚胎頭部，石蠟包埋，6μm切片，HE染色，觀察腭發(fā)育過程腭突的變化。結(jié)果：妊娠第11.5d一次性給予地塞米松(Dex)1mL(用量為50mg/Kg)可誘發(fā)小鼠產(chǎn)生腭裂。模型組腭突體積瘦小，不能在中線區(qū)接觸融合，以致不能與腭突上方的鼻中隔接觸融合，胎鼠出現(xiàn)腭裂。結(jié)論：妊娠第11.5d一次性給予

2、小鼠足量地塞米松，可成功建立腭裂動物模型。為研究腭裂形成原因及分子機(jī)制提供了一個較好的模型?！娟P(guān)鍵詞】地塞米松；腭裂；模型/動物【ABSTRACT】Objective：Toinvestigatethemethodofconstructingthemodelofcleftpalateinducedbydexamethasone(DEX)．Methods：Thecleftpalatemouseembryomodelingmice．TheheadsofthemousesembryoGD12.5toGD16.5,thenfixedbeddedbyparaf

3、fin,sectioned6μmandHEstained．Thechangesofpalatineprocessentcourseofcleft．Results:CleftpalateatGD11.5couldbeinducedbyinjectingDEXatthedoseof50mg/kgonce.Thepalatineprocessandanaslseptum,ergeeachother,allinthemodelgroupsoastodevelopepalatecleftontheembryo．Conclusion:Injectingenoug

4、hdoseDEXonceatGD11.5caninducethecleftpalatemouseembryomodelsuccessfully．Itisaperfectmodelforstudyingthereasonsandmechanismofcleftpalateforming．【KEYodels/Animal腭裂動物模型在腭裂病因?qū)W、形成機(jī)制及治療方法等研究中具有重要作用[1]。先天性腭裂的發(fā)生率約為0．1%，其發(fā)生主要是由于早期發(fā)育過程中腭突融合障礙所致，通常是遺傳及環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，其中妊娠早期誤服藥物也可能是其發(fā)生原因之一。在胚胎

5、發(fā)育過程中腭的正常發(fā)育在很大程度上取決于環(huán)境因素，與腭裂發(fā)生有著密切的關(guān)系。胚胎腭器官發(fā)生期是器官的形成過程，同時又是胚胎的致畸敏感階段。本實驗擬通過對胚胎發(fā)育的漸進(jìn)性形態(tài)學(xué)觀察，揭示腭發(fā)育及腭裂形成過程，從而建立腭裂動物模型。1材料與方法1．1實驗動物成年健康未生育昆明小鼠（體重為22～25g）（北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心），胎鼠為孕12.5d、13.5d、14.5d、15.5d、16.5d（足月為19～21d）。1．2實驗材料試劑：醋酸地塞米松注射液（華北制藥集團(tuán)）、PBS液（0．01M）、Bouins固定液、酒精、蘇木精伊紅染液、生理鹽水；

6、儀器：OLYNPUSBX31，Motic6.0醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)和手術(shù)器械，如鑷子、解剖刀、解剖剪、止血鉗、注射器、培養(yǎng)皿。1．3模型的建立方法隨機(jī)選取健康、生活狀態(tài)相近的小鼠，雌雄按2∶1于晚18∶00合籠，并于次日早7：30檢查雌性小鼠的陰栓，查見陰栓之日定為孕0d（0GD），第11天14∶00定為孕11.5d（11.5GD）[2]。所有小鼠均自由飲水及標(biāo)準(zhǔn)小鼠飼料喂養(yǎng)，孕鼠隨機(jī)分為模型組和對照組，每組各20只孕鼠。模型組孕鼠于妊娠第11.5d腹腔內(nèi)注射50mg/Kg地塞米松，誘發(fā)胚胎腭裂畸形；對照組孕鼠于妊娠第11.5d腹腔內(nèi)注射等量生理鹽水。

7、各組孕鼠分別于12.5d、13.5d、14.5d、15.5d、16.5d以頸椎脫臼法處死，并立即于冰塊上操作，剖腹取出胎鼠。1．4取材方法取出胎鼠的方法：孕鼠處死后取仰臥位，立即放置于冰塊上固定，在小鼠腹中線最底部陰道口上方皮膚剪開“一”字形切口，然后向頭部作“U”形皮瓣，充分暴露腹腔器官。其中可見雙角子宮位于腹腔的兩側(cè)以及帶有胎盤和羊膜的胚胎成串珠樣排列于子宮中，不同生長期的胎鼠體積大小不一。用剪子分離子宮與陰道相連的部位，取出胎鼠立即放至盛有冷PBS液（4℃，0.01MpH7.2～7.4）的培養(yǎng)皿中，并用鑷子剝離胎盤和羊膜，PBS洗滌，Bouin

8、固定液24h，使固定液充分穿透組織。分離胎鼠頭部方法：由于胎鼠體積大小不一，12.5d、13.5d、14.5