基質(zhì)金屬蛋白酶2在膽管癌組織中的表達(dá)及與預(yù)后的

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1、基質(zhì)金屬蛋白酶2在膽管癌組織中的表達(dá)及與預(yù)后的【摘要】目的：探討基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)在膽管癌(CCA)組織中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系.方法：隨機(jī)選取CCA患者106例，應(yīng)用SP免疫組化方法檢測(cè)MMP2蛋白的表達(dá).其中89例術(shù)后隨訪1～60mo，分析MMP2蛋白與CCA患者預(yù)后的相關(guān)性.結(jié)果：MMP2蛋白在CCA組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為76.42%(81/106)，并與CCA組織的臨床病理學(xué)特征及患者的預(yù)后均有密切的關(guān)系.在發(fā)生腫瘤浸潤(rùn)、淋巴道轉(zhuǎn)移及低分化的腫瘤組織中，MMP2蛋白高表達(dá).此外，MMP2蛋白陽(yáng)性表達(dá)的CCA患者的生存率明顯低于陰性表達(dá)的患者(P<0.01)

2、.結(jié)論：MMP2蛋白的表達(dá)可能與CCA的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)；檢測(cè)MMP2蛋白在CCA組織中的陽(yáng)性表達(dá)率，并結(jié)合其臨床病理學(xué)分級(jí)，可提高對(duì)患者預(yù)后的判斷準(zhǔn)確性.【關(guān)鍵詞】基質(zhì)金屬蛋白酶類；膽管腫瘤；臨床病理學(xué)；預(yù)后0引言腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的基本病理學(xué)特征，也是絕大多數(shù)腫瘤患者主要的死亡原因之一.同時(shí)，大量研究已證實(shí)惡性腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移與癌基因、生長(zhǎng)基因及其受體基因的活化、抑癌基因的失活或丟失密切相關(guān).因而，研究膽管癌（cholangiocarcinoma，CCA）的相關(guān)基因不僅有利于理解其發(fā)病機(jī)制，還可能發(fā)現(xiàn)在診斷和評(píng)價(jià)預(yù)后中具有臨床意義的分子標(biāo)記物.基質(zhì)金屬蛋白酶2（matrixm

3、etalloproteinase2，MMP2），又名明膠酶A,是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的主要成員之一［1］.已有多項(xiàng)研究表明，MMP2蛋白在乳腺癌、肝癌等多種腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用，并可用于預(yù)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移［2-3］.然而，關(guān)于MMP2蛋白的表達(dá)與CCA病程進(jìn)展的關(guān)系鮮見(jiàn)報(bào)道.我們采用免疫組化方法檢測(cè)106例CCA組織中MMP2蛋白的表達(dá)情況，探討其與CCA發(fā)生、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的相關(guān)性.1材料和方法1.1材料我院普外科200002/200202經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理檢查證實(shí)的膽管癌組織標(biāo)本106（男57，女49）例；年齡50.1±13.7(27～79)歲.患者術(shù)前均未行化放療.

4、對(duì)于有完整臨床及隨訪資料的89例患者進(jìn)行為期1～60mo的隨訪研究.對(duì)照組標(biāo)本15例，為非腫瘤組織中的正常膽總管組織.鼠抗人MMP2mAb（工作濃度1∶100）和免疫組化采用的SP法試劑盒均購(gòu)自北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司.1.2方法采用免疫組織化學(xué)SP法染色，標(biāo)本經(jīng)40g/L中性多聚甲醛固定,石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，70℃烤片15min.脫蠟至水，30mL/LH2O2滅活內(nèi)源酶，PBS漂洗5min×3次.正常羊血清室溫孵育15min.滴加20～30μLPBS稀釋的一抗4℃過(guò)夜.PBS漂洗5min×3次.二抗（生物素標(biāo)記的山羊抗鼠IgG，1∶500）于37℃孵育45min，PBS漂洗5min

5、×3次.DAB顯色5～10min，自來(lái)水充分洗滌，蘇木素復(fù)染5min，沖洗5min.脫水、透明、封片，鏡檢.設(shè)陽(yáng)性對(duì)照,用PBS替代第一抗體作陰性對(duì)照.MMP2蛋白表達(dá)陽(yáng)性為細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒，不出現(xiàn)者為陰性.在光鏡下（400×）觀察10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)打分標(biāo)準(zhǔn)如下：0分為陰性，1分為10%～50%細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)，2分為51%～75%細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)，3分為>75%細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá).統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)用SPSS12.0處理,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn).生存分析用KaplanMeier法.P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.2結(jié)果2.1MMP2蛋白表達(dá)及

6、其與CCA臨床病理參數(shù)的關(guān)系免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，在CCA組織中，MMP2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)主要定位于癌細(xì)胞質(zhì)，呈彌漫分布的棕黃色顆粒.MMP2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為76.42%(81/106)，而在正常膽總管組織中不表達(dá).MMP2蛋白在CCA組織中的表達(dá)情況與患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系見(jiàn)表1.MMP2蛋白的表達(dá)與CCA分化程度、TNM分期、有無(wú)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān).低分化及存在浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中，MMP2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率高于高、中分化（P=0.02）及未發(fā)生浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移者（P<0.01）；TNMⅠ~Ⅱ期的CCA組織中MMP2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于TNMⅢ~Ⅳ期的CCA組織(P=0.0

7、1).表1MMP2蛋白表達(dá)與CCA臨床病理參數(shù)的關(guān)系2.2MMP2蛋白表達(dá)與CCA患者預(yù)后的關(guān)系本研究對(duì)89例CCA患者進(jìn)行了術(shù)后隨訪研究.MMP2蛋白表達(dá)情況與患者術(shù)后生存率的關(guān)系分析如表2，圖1所示.根據(jù)TNM分期和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移情況分組的CCA患者中，有MMP2蛋白陽(yáng)性表達(dá)的患者，其生存率則明顯低于陰性表達(dá)者.從生存分析結(jié)果看，當(dāng)MMP2蛋白陰性表達(dá)時(shí)，CCA患者的生存率高于MMP2蛋白陽(yáng)性表達(dá)的