解毒通絡(luò)調(diào)肝散對胰島素抵抗大鼠肝臟nfκb及mcp1表達(dá)的影響

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1、解毒通絡(luò)調(diào)肝散對胰島素抵抗大鼠肝臟NFκB及MCP1表達(dá)的影響【摘要】目的觀察解毒通絡(luò)調(diào)肝散對糖尿病(DM)胰島素抵抗(IR)模型大鼠肝臟中核因子(NF)κB及單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)1表達(dá)的影響。方法采用高脂飲食加鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)DMIR大鼠模型。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、二甲雙胍組、吡咯列酮組和解毒通絡(luò)調(diào)肝組。給藥8onocytechemoattractantprotein(MCP)1ofliverininsulinresistant(IR)rats.MethodsIRmodelratsinducedbyhighfatandgluco

2、sefoodandSTZlydividedintomodel，metformin，pioglitazone，andJDTLTGSgroups.After8aceuticalmechanismsmightbecloselyrelatedodelgroupliver，andinhibitingtheinflammatorypathogenesisinliver.　　【Keyoattractantprotein(MCP)1　　胰島素抵抗(IR)是2型糖尿病(T2DM)的重要發(fā)病機(jī)制之一，但其具體的病理基礎(chǔ)較為復(fù)雜，國內(nèi)已有中醫(yī)藥防治IR的臨床及試驗(yàn)報(bào)道。前期工作表明〔

3、1〕，解毒通絡(luò)調(diào)肝散能改善實(shí)驗(yàn)動(dòng)物IR，為進(jìn)一步探討其改善IR的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)觀察了解毒通絡(luò)調(diào)肝散對實(shí)驗(yàn)性DM大鼠肝組織核因子κB(NFκB)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP1)及MCP1mRNA表達(dá)的影響，探討肝組織NFκB與MCP1途徑與T2DM、IR之間的關(guān)系?！　?材料與方法　　1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組清潔級8周齡雄性模型組52只。正常對照組給予基礎(chǔ)飼料，模型組給予高熱量飼料。4g/kg，于注射STZ1mol/L和120min血糖>11.1mmol/L為DM，具備上述一條為糖耐量減低(IGT)〔2〕。取DM或IGT模型組動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)對象。將造模

4、成功大鼠48只按血糖峰值分層，隨機(jī)分為模型組(n=12)，中藥組(n=12)，二甲雙胍組(n=12)，吡格列酮組(n=12)。3個(gè)治療組分別每日定時(shí)灌服解毒通絡(luò)調(diào)肝散懸混液5g·kg-1·d-1、二甲雙胍水溶液0.5g·kg-1·d-1、吡格列酮懸混液5mg·kg-1·d-1，動(dòng)物自由進(jìn)食飲水，正常對照組喂普通飼料，其他組喂高熱量飼料。治療周期為8a公司;末端全血葡萄糖測試條：北京怡成生物電子技術(shù)有限公司。胰島素放免試劑盒購自北京東亞生物技術(shù)有限公司。兔抗大鼠NFκB、MCP1多克隆抗體購自武漢博士德公司?！　?.3檢測指標(biāo)及方法　　1.3.1生化指標(biāo)的檢測血

5、糖：怡成血糖儀檢測;血清胰島素：磁酶免分析儀I(美國BioRad)檢測;胰島素敏感指數(shù)(ISI)：Ln(1/空腹血糖×空腹胰島素)?！　?.3.2肝組織NFκBp65、MCP1蛋白表達(dá)測定采用免疫組織化學(xué)SP法檢測。一抗分別為兔抗大鼠NFκBp65(工作濃度1∶100)，MCP1多抗(工作濃度：1∶100);二抗均為山羊抗兔IgG，生物素標(biāo)記來自抗兔的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素SP試劑盒。嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行?！　?.3.3免疫組化染色半定量評分所有切片均由有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師盲法閱片作出診斷，每張切片觀察5個(gè)×400視野。結(jié)果評定標(biāo)準(zhǔn)：著色程度：不

6、著色者為0分，著色淡者為1分，中等著色為2分，著色深者為3分。著色細(xì)胞陽性范圍：無著色0分，著色陽性細(xì)胞小于1/3為1分，著色陽性細(xì)胞1/3～1/2為2分，著色陽性細(xì)胞大于1/2為3分。將每張切片著色程度與著色細(xì)胞陽性范圍得分各自相加為其最后計(jì)分?！　?.3.4肝組織MCP1mRNA表達(dá)測定按Trizol試劑說明書。根據(jù)文獻(xiàn)〔3〕合成MCP1寡核苷酸(PCR)引物。MCP1引物序列：上游5＇CACCTGCTGCTACTCATTCACT3＇;下游5＇GTTCTCTGTCATACTGGTCACTTC3＇。GAPDH引物序列：上游5＇ACCACAGTCC

7、ATGCCATCAC3＇;下游5＇TCCACCACCCTGTTGCTGTA3＇。引物由北京鼎國生物技術(shù)發(fā)展公司合成。擴(kuò)增條件為：94℃預(yù)變性2min后進(jìn)入如下循環(huán)：94℃→45s，55℃→45s，72℃→45s，循環(huán)數(shù)為30個(gè)，最后于72℃延伸10min。擴(kuò)增的MCP1長度為349bp，GAPDH長度為450bp。擴(kuò)增產(chǎn)物用凝膠成像分析系統(tǒng)進(jìn)行紫外光成像分析，以GAPDH密度作為參考定量標(biāo)準(zhǔn)，數(shù)值以兩者之吸光度(Int)×面積(Pix)比值表示，以對照組的比值作為標(biāo)準(zhǔn)1.0，計(jì)算MCP1基因相對表達(dá)量?！　?.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS1

8、3.0軟件