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《氯氨酮對大鼠心肌缺血再灌注心肌細胞凋亡和fas蛋》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。
1、氯氨酮對大鼠心肌缺血再灌注心肌細胞凋亡和Fas蛋【關鍵詞】心肌缺血再灌注損傷；,,心肌細胞凋亡；,,氯胺酮；,,Fas蛋白；,,Bcl 摘要：目的：探討氯胺酮作用下大鼠實驗性心肌缺血再灌注時心肌細胞凋亡與Fas及Bcl2蛋白表達的變化及與心肌組織損傷的關系，并分析心肌組織病理學損傷程度。方法：以穿線結扎或松扎左冠狀動脈制備大鼠心肌缺血再灌注模型。32只大鼠隨機分成假手術組(假手術4.5h)、缺血再灌注組(缺血30min、再灌注4h)、低劑量氯胺酮+缺血再灌注組(缺血30min、再灌注4h)及高劑量氯胺酮+缺血再灌注組(
2、缺血30min、再灌注個4h)。以缺口末端標記法檢測心肌細胞凋亡的變化,SP免疫組化法分別檢測Fas與Bcl2蛋白水平變化，做病理組織切片檢查心肌損傷情況。結果：心肌缺血再灌注后心肌細胞凋亡指數及Fas蛋白陽性染色指數與Bcl2蛋白陽性染色指數均增加,氯氨酮可減少心肌凋亡，減少Fas和Bcl2蛋白陽性細胞表達;心肌缺血再灌注后心肌組織呈大小不一的灶性壞死,壞死周圍有炎性細胞浸潤，氯胺酮作用后壞死減輕，低劑量氯胺酮作用更明顯。結論：心肌缺血再灌注時心肌細胞凋亡、Fas基因的蛋白與Bcl2蛋白表達量均增加,氯氨酮可減少心肌凋
3、亡,減少細胞Fas和Bcl2蛋白陽性表達,從而減輕心肌損傷，且低劑量氯氨酮作用更明顯?！ ￡P鍵詞：心肌缺血再灌注損傷；心肌細胞凋亡；氯胺酮；Fas蛋白；Bcl2蛋白 細胞凋亡不同于細胞壞死的另一種細胞死亡形式,它是一個受遺傳基因調節(jié)的生理學細胞自殺過程或程序性細胞死亡［1］。研究表明在心肌缺血再灌注過程時，大量氧自由基生成、細胞內鈣超載、大量中性粒細胞浸潤以及線粒體損傷等均可促進心肌細胞凋亡，造成心肌損傷。而細胞凋亡中,凋亡刺激基因的蛋白表達產物Fas蛋白及抗凋亡因子Bcl2蛋白的作用被認為中有重要意義。有研究表明氯
4、胺酮可抑制心肌缺血再灌注損傷，但對其是否抑制心肌中的細胞凋亡并不清楚。本實驗研究氯胺酮對其作用下大鼠心肌缺血再灌注時心肌細胞凋亡與Fas及Bcl2蛋白表達量的變化及與心肌組織損傷的關系?！ ?材料與方法 11實驗材料與儀器小型動物呼吸機(浙江大學實驗儀器廠),心電圖檢測儀(浙江大學實驗儀器廠)。細胞凋亡原位檢測試劑盒(InSituCellDeathDetectionKit,POD)購自BoehringerMannheim公司,兔抗鼠Fas多克隆抗體及FasL多克隆抗體均購自SantaCruz公司。SABC試劑盒購自于博
5、士德公司。 12實驗動物及分組雄性健康SD大鼠（6個月左右）32只，由長江大學醫(yī)學院實驗動物中心提供,體重250~300g,隨機分為4組，每組8只。A組為假手術對照組；B組為缺血再灌注模型對照組；C組為2mg/kg氯胺酮+缺血再灌注模型組;D組為4mg/kg氯胺酮+缺血再灌注組?！ ?3動物模型制備10%水合氯醛40mg/kg腹腔注射麻醉，連接多功能監(jiān)護儀記錄Ⅱ導心電圖；氣管切開，接小型動物呼吸機進行機械通氣，呼吸頻率60次/分，潮氣量2ml/100g，于左胸第四肋間打開胸腔暴露心臟，在左心耳1mm左冠狀動脈處，用眼科
6、外用不銹小圓針穿過心肌淺層，穩(wěn)定10min后將U型含有銅絲的膠管置于冠狀動脈表面一起結扎（A組不結扎，B、C、D組結扎）；結扎開始左心室心尖部即由紅色變暗，30min后呈暗紅色，心電圖中出現ST段抬高，說明缺血形成。此時B、C、D組分別由右腹股靜脈注入10mL/kg生理鹽水、2mg/kg氯胺酮、4mg/kg氯胺酮,解開結扎線后進行再灌注。在再灌注4h后斷頭處死，將新鮮心肌組織標本放入40g/L中性甲醛溶液中固定,然后集中進行石蠟包埋,切片于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩！ ?4凋亡細胞原位標記與半定量分析石蠟包埋的心肌組織,采用末端
7、脫氧核苷酸轉移酶(TdT酶)介導的帶熒光的dUTP缺口末端標記法檢測。結果根據凋亡陽性細胞分布情況,每張切片拍攝5個陽性視野,每視野記數300個心肌細胞中陽性細胞數,以平均計算陽性細胞所占的百分比作為凋亡細胞陽性指數(AI)?！ ?5Fas基因和Bcl2基因蛋白表達檢測與半定量分析取上述石蠟標本相應部位的連續(xù)切片各5張，采用鏈霉親和素生物素過氧化酶復合物技術(SABC)法進行免疫組化染色和HRP/AEC顯色法。每張切片于陽性表達區(qū)域選擇10個無重疊視野,用圖像分析儀進行分析,并計算其光密度值的均值。采用光密度值的均值×1
8、02表示?！ ?6心肌組織病理學分析切片于HE染色后觀察其組織病理性損傷改變?！ ?7統(tǒng)計學處理采用SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析,多組間比較用單因素方差分析，q檢驗進行組間比較，P<0.05為差異有顯著性。 2結果 21心肌凋亡細胞計數心肌組織中凋亡細胞的分布及變化:經TUNEL染色及蘇木素復染后凋亡細胞核呈
