麝香烏龍丸對兔骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡的影響

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1、麝香烏龍丸對兔骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡的影響【摘要】目的觀察麝香烏龍丸對兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡和凋亡調(diào)控基因bcl-2及其抑制基因bax的影響,探討麝香烏龍丸對關(guān)節(jié)軟骨的保護作用是否與抑制細胞凋亡與調(diào)節(jié)bcl-2及bax的表達有關(guān)。方法選用健康日本大耳白兔30只，隨機分成正常對照組、造模組、麝香烏龍丸組。用1.6%木瓜蛋白酶膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射，建立兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型，4周后處死全部動物，取右膝關(guān)節(jié)脛骨內(nèi)側(cè)髁軟骨，軟骨組織切片用TUNEL法檢測軟骨細胞凋亡，免疫組化法檢測關(guān)節(jié)軟骨中bcl-2、bax的水平。結(jié)

2、果麝香烏龍丸組細胞凋亡率明顯低于造模組（P＜0.05），bcl-2在麝香烏龍丸組中的表達高于造模組（P＜0.05），bax的表達低于造模組（P＜0.05）。結(jié)論麝香烏龍丸通過上調(diào)bcl-2的表達，下調(diào)bax的表達，達到抑制兔實驗性膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨中軟骨細胞的過度凋亡，這可能是該藥治療骨性關(guān)節(jié)炎機制之一。【關(guān)鍵詞】麝香烏龍丸；膝骨關(guān)節(jié)炎；細胞凋亡　　Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofShexiang-pactsuppressorgenebax.Toexplore

3、therelationshipofShexiang-alerabbitslydividedintothreegroups:A.normalcontrolgroup,B.modelgroup,C.Shexiang-odelsbyinjectingpapaintotherightkneesofrabbits,after4alsedialtibialcondylecartilage.Cartilagetissuemunohistochemistryofarticularcartilageinthebcl-

4、2,baxlevel.ResultsTherateofapoptosisofthegroupCaybeonemechanismofShexiang-entofKOA.　　Keyg）將兔麻醉后，造模組和麝香烏頭丸組均于右膝關(guān)節(jié)處剔毛，碘伏消毒，將關(guān)節(jié)輕彎，經(jīng)髕腱內(nèi)側(cè)進針，關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射1.6%木瓜蛋白酶生理鹽水溶液0.5ml,隔3d注射1次,共注射3次。期間動物用標準飼料正常飼養(yǎng)。　　2.3給藥造模成功后第2天開始給藥。麝香烏龍丸組按成人每日每千克體重用藥量的6倍劑量作為大耳白兔每日每千克體重的等效劑量

5、(麝香烏龍丸0.6g/kg)，溶于10ml生理鹽水中灌胃，1次/d；正常組和造模組灌入等量生理鹽水；灌胃4周?！　?.4標本采集及處理于末次給藥后24h以氣栓法處死動物，逐層切開膝關(guān)節(jié)，切取脛骨內(nèi)側(cè)髁軟骨，10%中性福爾馬林溶液固定后,石蠟包埋，切片，用TUNEL法及免疫組織化學(xué)法檢測。　　2.5數(shù)據(jù)處理細胞凋亡及免疫組化結(jié)果均采用方差分析,運用SPSS13.10統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析。　　4討論　　骨性關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是一種慢性、漸進性、退行性的關(guān)節(jié)病變。骨性關(guān)節(jié)炎在所有關(guān)

6、節(jié)炎中是最常見的，隨著年齡的增長，患病率逐漸增加，嚴重影響著中老年人的健康和生活質(zhì)量。骨性關(guān)節(jié)炎的病因及發(fā)病機制目前尚不明確，其基本病理改變?yōu)槎喾N致病因素引起的進行性關(guān)節(jié)軟骨變性、破壞及喪失。近年來的研究顯示，軟骨細胞的過度凋亡可能是OA發(fā)病的重要原因［2］，因此抑制軟骨細胞凋亡成為防治骨性關(guān)節(jié)炎的重要途徑。軟骨細胞凋亡的調(diào)控途徑，目前研究較多的是Fas途徑和NO途徑，對于bcl-2基因家族的研究相對較少。表2麝香烏龍丸對軟骨細胞bcl-2、bax陽性率的影響（略）　　細胞凋亡是一個正常的生理過程，

7、是一種由基因調(diào)控的主動地去除非需要或損傷細胞的程序性死亡過程，然而過度凋亡則是病理性的。TUNEL技術(shù)在原位對凋亡的軟骨細胞檢測發(fā)現(xiàn)OA病人的軟骨細胞凋亡明顯高于正常人［3］。軟骨細胞凋亡是受凋亡相關(guān)癌基因調(diào)控的。bcl-2基因家族是細胞凋亡的重要調(diào)控基因，在細胞凋亡的過程中處于調(diào)控機制的終末部分，該基因家族在維持細胞生理性分化發(fā)育和細胞數(shù)量的動態(tài)平衡中具有重要作用。其中bcl-2基因所編碼的bcl-2蛋白，能阻止多種因素誘導(dǎo)的凋亡。而bax是與bcl-2作用相互拮抗的基因，它們結(jié)構(gòu)上具有一定同源性

8、，可相互結(jié)合形成二聚體。bcl-2的過量表達時，形成bcl-2同源二聚體，能抑制細胞凋亡，細胞受到保護［4］;而bax的過度表達，則可以與bcl-2形成異源二聚體，拮抗bcl-2抑細胞凋亡的作用［5］，那么細胞就走向凋亡?！　」切躁P(guān)節(jié)炎屬于中醫(yī)“骨痹”“痛痹”等范疇，其發(fā)病與年老肝腎虧虛、外感風(fēng)寒濕邪密切相關(guān)，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)氣血、痰瘀凝滯而發(fā)病?！秲?nèi)經(jīng)》說：“風(fēng)寒濕三氣雜至，合而為痹”；《證治準繩》云：“（膝痛）有風(fēng)、有寒、有閃挫、有瘀血、有痰積，皆實也，腎虛其本也?！?/p>