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1、HPLC法測(cè)定清開(kāi)靈注射液中豬去氧膽酸的含量【摘要】目的建立清開(kāi)靈注射液中豬去氧膽酸的含量測(cè)定方法。方法采用HPLC法,色譜柱為UltimateXB-C18(5μm,250mm×4.6mm),流動(dòng)相為乙腈-水-磷酸(35∶65∶0.1),流速為1mL/min,柱溫為40℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為192nm。結(jié)果豬去氧膽酸在0.20135～1.00675mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r＝0.9996,平均加樣回收率為98.25%,RSD＝1.26%。結(jié)論方法準(zhǔn)確、可靠,重復(fù)性好,可用于清開(kāi)靈注射液的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】高效液相色譜法；清開(kāi)靈注射液；豬去氧膽酸Abstract：Objecti
2、veToestablishamethodforcontentdeterminationofhyodeoxycholicacidinQingkailingInjection.MethodsAnUltimateXB-C18column(5μm,250mm×4.6mm)obilephaseofacetonitril-L/min.Thetemperatureofthecolumn.ResultsThereg/mL,r＝0.9996.Theaveragerecoveryethoda,純度98%)；清開(kāi)靈注射液(市售樣品3批,10mL/支,吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))。乙腈為色譜
3、純,其余所用試劑均為分析純。 2方法與結(jié)果 2.1色譜條件 參考2005版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)清開(kāi)靈注射液中膽酸含量測(cè)定的色譜條件[2]。經(jīng)比較色譜峰分離情況以及分離度,確定的色譜條件為色譜柱UltimateXB-C18(5μm,250mm×4.6mm),流動(dòng)相為乙腈-水-磷酸(35∶65∶0.1),流速為1mL/min,柱溫為40℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為192nm?！ ?.2溶液制備 2.2.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取豬去氧膽酸對(duì)照品適量,加60%乙腈制成每1mL含2.0135mg的溶液,作為對(duì)照品溶液?！ ?.2.2供試品溶液的制備 精密量取本品10mL
4、,加稀鹽酸0.5mL,用醋酸乙酯提取4次(20、20、15、15mL),合并醋酸乙酯液,蒸干,殘?jiān)?0%乙腈適量使溶解,并轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中,用60%乙腈稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò),取續(xù)濾液,即得?！ ?.2.3陰性溶液的制備 取缺膽酸、豬去氧膽酸的陰性制劑,按供試液溶液制備方法制備,即得?！ ?.3專(zhuān)屬性試驗(yàn) 分別吸取豬去氧膽酸對(duì)照品溶液、供試品溶液與陰性溶液,按上述色譜條件進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果供試品、豬去氧膽酸對(duì)照品在相應(yīng)時(shí)間出現(xiàn)豬去氧膽酸特征吸收峰,陰性溶液無(wú)干擾吸收峰。結(jié)果見(jiàn)圖1?！ ?.4標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 分別精密吸取豬去氧膽酸對(duì)照品溶液
5、1、2、3、4、5mL,加60%乙腈稀釋至10mL,在上述色譜條件下,進(jìn)樣10μL,測(cè)定峰面積值。以峰面積平均值和對(duì)照品溶液濃度進(jìn)行回歸處理,回歸方程為：A＝5.75510×105C－2.114200×103,r＝0.9996；豬去氧膽酸在0.20135～1.00675mg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系?！ ?.5最低檢測(cè)限 取0.20135mg/mL的對(duì)照品溶液用60%乙腈稀釋1倍,得0.101675mg/mL的溶液,取10μL進(jìn)樣測(cè)定,S/N＝3,故最低檢測(cè)限為1μg?！ ?.6精密度試驗(yàn)取濃度為0.60405mg/mL對(duì)照品溶液10μL進(jìn)樣測(cè)定,連續(xù)6次,結(jié)果
6、RSD＝1.6%?！ ?.7重復(fù)性試驗(yàn)取清開(kāi)靈注射液樣品,按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試液,平行試驗(yàn)6份,測(cè)定豬去氧膽酸的含量,結(jié)果RSD＝2.4%。 2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液,每隔2.0h進(jìn)樣10μL,測(cè)定豬去氧膽酸12h內(nèi)的峰面積值,結(jié)果RSD＝2.8%。 2.9加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取豬去氧膽酸對(duì)照品,配制成濃度為2.0135mg/mL對(duì)照品溶液。另取清開(kāi)靈注射液(批號(hào)060102)5mL,平行試驗(yàn)9份,分別加入對(duì)照品溶液,按上述色譜條件測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表1。表1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(略) 2.10樣品含量測(cè)定取本品3批(批號(hào)分別為060101、060102、06
7、0103),按供試品溶液制備方法制備供試液,測(cè)定豬去氧膽酸的含量,結(jié)果見(jiàn)表2。表23批樣品中豬去氧膽酸的含量測(cè)定結(jié)果(略) 3討論醋酸乙酯振搖提取次數(shù)對(duì)豬去氧膽酸提取有一定影響,經(jīng)試驗(yàn)考察,振搖提取3次可提取98%,提取4次可提取完全,結(jié)果與《中華人民共和國(guó)藥典》中膽酸的提取相一致?！ 〗?jīng)試驗(yàn),在上述色譜條件下,膽酸與豬去氧膽酸的分離度為3.7,可完全分離,因此,可同時(shí)測(cè)定這兩個(gè)成分,更利于清開(kāi)靈注射液的質(zhì)量控制。本試驗(yàn)?zāi)懰?、豬去氧膽酸的含量測(cè)定方法均與藥典中膽酸含量測(cè)定方法一致,考慮到膽酸含量測(cè)定方
