紅曲類產(chǎn)品中桔青霉素的測(cè)定

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1、GB/Txxxxxxxxxxxx食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)紅曲類產(chǎn)品中桔青霉素的測(cè)定（征求意見稿）xxxx-xx-xx實(shí)施xxxx-xx-xx發(fā)布中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布1.1.1.1　2010-06-01實(shí)施2010-××-××發(fā)布GB/Txxxxxxxxxxxx前言本標(biāo)準(zhǔn)代替GB5009.222-2008。本標(biāo)準(zhǔn)與GB5009.222-2008相比，主要變化如下：——修改了標(biāo)準(zhǔn)的中文名稱，標(biāo)準(zhǔn)中文名稱改為《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)紅區(qū)類產(chǎn)品中桔青霉素的測(cè)定（理化方法）》；——按照GB//T20001.4-2001對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了修改。

2、7GB/Txxxxxxxxxxxx食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)紅曲類產(chǎn)品中桔青霉素的測(cè)定1　范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了紅曲類產(chǎn)品中桔青霉素的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于紅曲米、紅曲紅（固態(tài)、液態(tài)）、紅曲發(fā)酵液和用紅曲菌生產(chǎn)的保健食品中桔青霉素的測(cè)定。2　原理液態(tài)紅曲類樣品經(jīng)乙醇提取、離心、過濾后經(jīng)高效液相色譜儀（HPLC）分析；固態(tài)紅曲類樣品經(jīng)甲苯-乙酸乙酯-甲酸提取、超聲波萃取、離心、過濾后經(jīng)HPLC分析，外標(biāo)法定量。3　試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。3.1試劑3.1.1乙腈（CH3CN）：色譜純。3.1.2磷酸（

3、H3PO4）：色譜純。3.1.3甲醇（CH3OH）：色譜純。3.1.4甲苯（C6H5CH3）。3.1.5乙酸乙酯（C4H8O2）。3.1.6甲酸（CH2O2）。3.1.7無水乙醇（C2H5OH）：色譜純。3.2試劑配制復(fù)合萃取劑（TEF）：甲苯–乙酸乙酯–甲酸（7+3+1），配制方法是將7份體積的甲苯（3.5）、3份體積乙酸乙酯（3.1.5）和1份體積酌甲酸（3.1.6）混合而成。3.3標(biāo)準(zhǔn)品桔青霉素（C13H14O5）標(biāo)準(zhǔn)品：純度>99%。3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液制備3.4.1桔青霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（50mg/L）：準(zhǔn)確稱取桔青霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至

4、濃度為50mg/L，密封后4℃冰箱避光保存。3.4.2桔青霉素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5mg/L）：用甲醇將10mL的50mg/L桔青霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液定容至100mL，密封后4℃冰箱避光保存，工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。工作液從冰箱取出后應(yīng)于室溫下至少放置10min，渦旋混勻后方可使用。7GB/Txxxxxxxxxxxx3.4.3桔青霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液：將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇系列稀釋后，配成濃度為0.1mg/L、0.25mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液。1　儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜儀，配有熒光檢測(cè)器。4.2超聲波細(xì)胞破碎儀。4.3電子天平

5、（感量0.0001g）。4.4pH計(jì)（精度0.01）。4.5勻漿器。4.6離心機(jī)。4.7旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。4.8微孔有機(jī)濾膜（孔徑0.45μm）。4.9數(shù)顯恒溫水浴鍋（溫度精度土1℃）。4.10渦旋混勻器。4.11磁力攪拌器。2　分析步驟5.1試樣制備5.1.1液態(tài)紅曲樣品將帶有菌絲體的液態(tài)發(fā)酵紅曲樣品勻漿后用吸量管吸取10mL（液態(tài)紅曲紅樣品直接取樣10mL），置于50mL具塞試管中，加入20mL無水乙醇，60℃水浴加熱1h（期間不斷振搖），冷卻至室溫后轉(zhuǎn)入塑料離心管中，3000r/min離心15min，上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進(jìn)行HPLC分析。

6、5.1.2固態(tài)紅曲制品用電子天平（4.3）準(zhǔn)確稱取一定量固態(tài)紅曲樣品（色素用紅曲米為2g，用紅曲菌生產(chǎn)的保健食品為3g，釀酒用曲為3g）于50mL具塞比色管中，加入20mLTEF溶液（3.2），超聲提取10min（強(qiáng)度40%，工作5s，間隔5s），3000r/min離心20min，上清液轉(zhuǎn)入50mL具塞試管中，殘?jiān)?5mLTEF溶液（3.2）同上述步驟再提取兩次，合并三次提取上清液于50mL具塞比色管中，40℃真空濃縮（4.7）至干后加入30mL甲醇溶解，經(jīng)微孔有機(jī)濾膜（4.8）過濾后進(jìn)行HPLC分析。準(zhǔn)確稱取1g粉狀紅曲紅或紅曲黃色素祥品，在磁

7、力攪拌下緩緩加到盛有20mLTEF溶液（3.2）的燒杯中，繼續(xù)攪拌30min后，3000r/min離心20min，以下按固態(tài)紅曲樣品同樣的方法自“上清液轉(zhuǎn)入50mL具塞試管中”起，依法操作。5.2分析步驟5.2.1液相色譜分析條件a）色譜柱：C18色譜柱（150mm×4.6mm，粒度5μm）；b）柱溫：28℃；c）流動(dòng)相：乙腈（3.2）+水=35+65，水用色譜純磷酸（4.3）調(diào)pH至2.5；d）流速：1.0mL/min；e）檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)331nm，發(fā)射波長(zhǎng)500nm；f）進(jìn)樣量：20μL。5.2.2色譜分析7GB/Txxxxxxx

8、xxxxx分別將20pL不同質(zhì)量濃度（0.1mg/L、0.25mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L）的桔青霉素標(biāo)