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《zeb2對胃癌侵襲轉(zhuǎn)移影響及其機制的研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、原創(chuàng)性聲明本人聲明,所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的‘同志對本研究所作的貢獻均己在論文中作了明確的說明。作者簽名:繭壅丞日期:丑年生月型日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文,允許學(xué)位論文被查閱和借閱;學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容,可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時授權(quán)中國
2、科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》,并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。日期:苧年』月衛(wèi)日摘要第一章ZEB2、E.cadherin在胃癌組織和胃癌細胞株中的表達及意義IYJllllll2lJJIlllllllll9JIllllJ7lllll7lllrfl9112llllll目的:研究ZEB2、E.cadherin在胃癌組織和胃癌細胞株中的表達及其意義。方法:采用免疫組織化學(xué)法檢測胃癌組織及非癌性胃黏膜組織中ZEB2、E.cadherin蛋白的表達,分析ZEB2和E.cadherin的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,用Kaplan.Meier和Cox回歸分析法進行生存分
3、析。采用實時定量PCR法檢測人胃黏膜上皮細胞株GES.1及胃癌細胞株SGC7901和HGC27中ZEB2mRNA和E.cadherinmRNA的表達。結(jié)果:1.在胃癌組織中ZEB2陽性表達率(59.2%)明顯高于非癌性胃組織(19.O%),其表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)(P0.05)。Kaplan—Meier生存分析顯示,ZEB2陽性表達組、陰性表達組患者術(shù)后平均生存時間分別為37.603+3.909mo,52.258+4.046mo:ZEB2陽性表達組患者的5年生存率明顯低于陰性表達組患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<
4、O.05)。2.在胃癌組織中E—cadherin陽性表達率(56.6%)明顯低于非癌性胃組織(100%),其表達與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)(PO.05)。Kaplan—Meier生存分析顯示,E.cadherin陽性表達組、陰性表達組患盟±堂焦迨塞!主塞垣墨者術(shù)后平均生存時間分別為52.473+3.675mo,32.667+4.225mo;E.cadherin陽性表達組患者的5年生存率明顯高于陰性表達組患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P
5、95,P=0.01)。4.胃癌細胞株中ZEB2mRNA的相對表達量高于人胃黏膜上皮細胞株GES.1(P
6、膜的惡性轉(zhuǎn)變,在胃癌浸潤轉(zhuǎn)移中起一定的作用。3.在胃癌組織中ZEB2與E.cadherin的表達呈負相關(guān)性,ZEB2可能通過抑制E—cadherin的表達促進胃癌的轉(zhuǎn)移。第二章靶向ZEB2基因的shRNA表達載體的構(gòu)建及鑒定目的:構(gòu)建靶向ZEB2基因的短發(fā)夾RNA(shRNA)真核表達擅±堂焦途塞主塞垣蔓質(zhì)粒,并進一步研究其對人胃癌HGC27細胞ZEB2表達的抑制效應(yīng)。方法:設(shè)計3條靶向ZEB2基因的shRNA,經(jīng)退火成互補雙鏈,克隆到質(zhì)粒pGPU6/GFP/Neo中構(gòu)建重組載體(pGPU6/GFP/Neo.ZEB2.shRNAl,2,3),經(jīng)酶切鑒定和測序確認后,將3個重組表達載體利用
7、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染到人胃癌細胞株HGC27,采用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達,利用Real.timePCR,Westernblot法檢測轉(zhuǎn)染前后ZEB2mRNA和蛋白表達的情況,并篩選出最佳抑制效率的shRNA表達質(zhì)粒。結(jié)果:1.通過酶切鑒定和測序分析,靶向ZEB2基因的3個pGPU6/GFP/Neo-shRNA重組載體構(gòu)建成功。2.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HGC27細胞后,經(jīng)Real.timePCR檢測,3個重組表達載體pGPU6/GFP/Neo