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1、槲皮素聯(lián)合川芎嗪對(duì)小鼠Lewis肺癌生長(zhǎng)的抑制作用作者：符慧群，李杰平，賀兼斌，張平【摘要】目的探討槲皮素聯(lián)合川芎嗪對(duì)小鼠Leechanismofquercetinbinationethylpyrazineongroainmice.MethodsTheLeamodelsofC57BLmiceicelydividedinto4groups:controlgroup(GroupA)，quercetingroup(GroupB)，tetramethylpyrazinegroup(GroupC)andquercetin+tetr
2、amethylpyrazinegroup(GroupD).Differenttreatmentsday2aftertransplantationandallmiceesoftumorseasurerespectivelyduringthetherapytime；subcutaneoustumorsination.Theexpressionofmicrovesseldensity(MVD),proliferatingcellnuclearantigen(PA)andvascularendothelialgromunhist
3、ochemicalmethod.Theapoptosisindex(AI)easuredbybiotinyateddUTPnickandlabeling(TUNEL).Results（1）ThetumorgroorarkedlydecreasedinGroupB,CandDparedethylpyrazinecanremarkablyinhibitthegroainmice,anditsmechanismsmightberelativetoinhibitingtheangiogenesisandtumorprolife
4、ratingandinducingapoptosis. Keyethylpyrazine；Lea；Vascularendothelialgrog/2ml，批號(hào)9803161）購(gòu)于無(wú)錫市第七制藥廠，丙二醇（分析純）為重慶東方試劑廠生產(chǎn)，槲皮素購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，TUNEL凋亡檢測(cè)試劑盒、兔抗鼠PA單抗及SABC免疫組化試劑盒購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司，VEGF兔抗鼠單抗購(gòu)于美國(guó)SantaCruz生物科技公司，CD34兔抗鼠一抗、DAB顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物工程公司?！ ?.2模型制備與分組給藥 取接種Lel）
5、1∶3制備勻漿液備用。另取C57BL小鼠（購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物繁殖所）40只，雌雄各半，體重18～20g，每只小鼠于右腋皮下接種勻漿液，每只0.2ml，建立小鼠皮下腫瘤動(dòng)物模型。40只小鼠皮下移植處均成瘤，接種2d后隨機(jī)分成4組，每組10只。對(duì)照組（A組）：予丙二醇0.2ml+生理鹽水0.2ml腹腔注射，1次/d；槲皮素組（B組）：予槲皮素50mg/kg溶于0.2ml丙二醇+生理鹽水0.2ml腹腔注射，1次/d；川芎嗪組（C組）：予川芎嗪100mg/kg溶于0.2ml生理鹽水+丙二醇0.2ml腹腔注射，1次/d；槲皮素
6、+川芎嗪組（D組）：予槲皮素50mg/kg溶于0.2ml丙二醇+川芎嗪100mg/kg溶于0.2ml生理鹽水腹腔注射，1次/d。各組均連續(xù)給藥20d，第22d處死全部小鼠進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。 1.3一般檢測(cè) 接種前和接種后每2d稱1次體重，按體重變化調(diào)整給藥。接種后每2d測(cè)量1次小鼠皮下腫瘤最長(zhǎng)徑（a）和最短徑（b），計(jì)算腫瘤體積（V=a×b2/2），繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。第22d脫頸椎處死小鼠，完整剝離腫瘤稱重，計(jì)算抑瘤率，抑瘤率=（1-治療組平均瘤質(zhì)量/對(duì)照組平均瘤質(zhì)量）×100%?！ ?.4HE及免疫組化染色 取腫瘤組
7、織，10%中性甲醛固定、石蠟包理，5μm連續(xù)切片，HE染色，光鏡觀察。采用免疫組化SABC法檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、增殖核抗原（PA）及腫瘤組織微血管密度（MVD）的表達(dá)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，陰性對(duì)照用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗。VEGF的判定標(biāo)準(zhǔn)：高倍鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞胞漿及胞膜中呈棕黃色陽(yáng)性細(xì)胞<10%為陰性，≥10%陽(yáng)性，采用全自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)測(cè)定腫瘤組織中VEGF的平均灰度值(灰度值越低，其蛋白質(zhì)表達(dá)越高)。PA結(jié)果，以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞,選擇陽(yáng)性細(xì)胞密集區(qū)
8、域，排除壞死區(qū)，每張切片計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞總數(shù)，計(jì)數(shù)增殖指數(shù)SPF。MVD的判定標(biāo)準(zhǔn)，凡與臨近的腫瘤細(xì)胞、微血管或結(jié)締組織分開(kāi)的，呈棕黃色CD34染色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞串計(jì)為一個(gè)血管，但肌層較厚，或管腔面積>8個(gè)紅細(xì)胞直徑的血管不計(jì)數(shù)。MVD計(jì)數(shù)參考WEIdner等[4]方法?！ ?.5
