資源描述：
《孤啡肽誘導白血病細胞k562凋亡》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、孤啡肽誘導白血病細胞K562凋亡作者：郭鴻 趙麗 張寶紅 李娟 陳軒【摘要】 本研究探討孤啡肽對白血病細胞K562增殖的影響及誘導凋亡的作用，采用MTT（四唑氮藍）法檢測不同濃度的孤啡肽對K562細胞生長的影響，應用瑞氏染色、電子顯微鏡觀察藥物作用后K562細胞形態(tài)的改變，流式細胞術檢測孤啡肽對K562細胞細胞凋亡作用，DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察孤啡肽作用后K562細胞內(nèi)DNA的損傷程度。結果表明：10-6-10-13mol/L孤啡肽明顯抑制K562細胞的生長，且存在時間依賴性，而劑量依賴性不明顯；10-6-10-7、10
2、-9、10-12mol/L孤啡肽作用72小時后顯示明顯的細胞毒作用。與對照組相比，10-9mol/L孤啡肽作用72小時后K562細胞出現(xiàn)典型凋亡特征；流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)：0、10-7、10-8、10-9mol/L孤啡肽作用72小時后出現(xiàn)凋亡峰，凋亡率分別為0%、22.8%、23.8%、26.5%；DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示典型的梯狀條帶。結論：孤啡肽能夠抑制K562細胞增殖，誘導其凋亡。【關鍵詞】孤啡肽；白血?。患毎蛲?；K562細胞 ApoptosisofK562CellsInducedbyNociceptin/Orph
3、aninFQ AbstractThestudyeasuredbyMTTassay.Morphologicalassessmentofapoptosisedissionelectronmicroscope.Theapoptosispeakeasuredbyfloetry.DNAfragmentatione-dependentlyandno-dose-dependentlyinhibitedtheproliferationofK562cellsatconcentrationsof10-6-10-13mol/L.Discret
4、emaximumofcytolyticactivityol/L.paredol/Lfor72hoursshoissionelectronmicroscope.Apoptosispeakol/LofOFQfor72hours,apoptosisratesentation(DNAladder).ItisconcludedthatOFQcaninhibittheproliferationofK562cellsandinducetheapoptosisinK562cells. Keyia;apoptosis;K562cell
5、內(nèi)源性阿片肽是在哺乳動物腦內(nèi)天然形成的具有阿片樣活性的物質(zhì)。以前，阿片及其受體的研究一直是分子神經(jīng)藥理學和神經(jīng)生物學研究的熱點，如其代表嗎啡已廣泛用于術后鎮(zhèn)痛。但是近年來大量的研究證明，阿片肽參與神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，并具有抗腫瘤和誘導細胞凋亡的作用［1］。曾有嗎啡、腦啡肽［2］、埃托啡［3］、內(nèi)嗎啡肽［4］誘導細胞凋亡的報道，孤啡肽也是內(nèi)源性阿片肽家族的成員，但尚未見相關報道。本實驗采用K562細胞為靶細胞，研究孤啡肽對K562細胞增殖的影響，探討孤啡肽作為白血病治療藥物的可能性和作用機制。 材料和方法
6、 材料 白血病細胞系K562為蘭州大學第一醫(yī)院中心實驗室保存的細胞系。孤啡肽由蘭州大學生命科學院合成、表征和純化，純度>99％，相對分子量為1809。RPMI1640培養(yǎng)液為Gibco公司產(chǎn)品，新生牛血清為杭州四季清生物有限公司產(chǎn)品?！ 〖毎囵B(yǎng) 人白血病細胞K562細胞為懸浮生長的細胞，用含10％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，在37℃、5％CO2、飽和濕度條件下常規(guī)培養(yǎng)?！ ∷幬飳毎L影響的四唑氮鹽（MTT）比色法觀察 取對數(shù)生長期的K562細胞，以2×105/ml的密度接種于96孔板中，設10-6
7、、10-7、10-8、10-9、10-10、10-11、10-12、10-13mol/L孤啡肽作用組，每個濃度設4個復孔，同時設陰性對照。作用終止前4小時加入MTT溶液（濃度為5μg/ml），培養(yǎng)4小時后離心吸去上清，加入100μl的DMSO，37℃培養(yǎng)10分鐘，待結晶完全溶解后，用酶標儀于490nm處測量吸光度A值，計算孤啡肽對K562細胞增殖的抑制率（inhibitionrate，IR）。IR=［(Acontrol-Asample)/Acontrol］×100% 細胞形態(tài)學觀察 收集經(jīng)10-9mol/L孤啡肽處理7
8、2小時的K562細胞和對照組K562細胞后，用0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS）洗2次，一部分細胞涂片，常規(guī)瑞氏染色；另一部分用0.25%的戊二醛固定24小時，1％四氧化二鋨固定2小時，用0.1mol/LPBS洗2次，梯度丙酮脫水，Epon812包埋，制作超薄切片，電子染色，EM-2000EX電鏡觀
