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1、高效液相色譜法測定三棱超臨界萃取物中蘆丁的含量【摘要】 目的建立三棱超臨界CO2萃取物中蘆丁的鑒別和含量測定方法。方法在聚酰胺膜上點樣，以80%乙醇作為展開劑鑒別蘆丁，采用SymmetryC18色譜柱，以乙腈-四氫呋喃-0.2%枸櫞酸（14∶1∶85）為流動相，柱溫25℃，在流速為1.0ml·min-1，360nm的檢測波長下，測定蘆丁含量。結果在三棱的超臨界萃取物中含有蘆丁成分，建立的液相色譜方法在蘆丁濃度為0.00340～0.02432mg·ml-1的范圍內線性關系良好，樣品在8h內穩(wěn)定，平均加樣回收率為98.56%，以峰面積作精密度實驗，RSD為1.3
2、8%。結論三棱的超臨界萃取物中含有蘆丁，建立的高效液相色譜方法線性關系良好，精密度和回收率高，適合于三棱中蘆丁含量的測定。【關鍵詞】反相高效液相色譜；薄層色譜鑒別；蘆??；超臨界萃取 Abstract:ObjectiveToexplorestoloniferumbyTLCandestablishamethodtodetermineitscontentbyRP-HPLC.MethodsThedeterminationmetryC18columnat25℃.Methodstetrahydrofuran:0.2%citricacid(14∶1∶85)obilepha
3、seatavelocityof1ml·min-1andthedetection.ResultsRutinStoloniferum.Thecalibrationcurveg·ml-1forrutin.Thesamplestoloniferum.TheestablishedRP-HPLCmethodhasperfectlinearrelationship,highprecisionandrecoveryrateanditissuitabletodeterminethecontentofrutininSFEextractofSparganiumStoloniferu
4、m. Keystoloniferum，始載于《本草拾遺》，為常用中藥，是荊三棱科植物黑三棱的干燥塊莖，主要含揮發(fā)油類和黃酮類〔1～3〕，具有抗凝血及抗血栓和鎮(zhèn)痛作用〔4〕，臨床用于治療中風病、冠心病、宮外孕、闌尾周圍膿腫及慢性肝炎、慢性盆腔炎等。另外其和莪術一起使用具有抑制腫瘤的功能〔5〕，在抗癌中藥的配方中起著非常重要的作用。目前文獻關于三棱的提取研究并不多，尤其是對其化學成分等基礎研究更少，文獻〔6〕報道的黃酮類成分為山萘酚和5,7,3',5'-四羥基雙氫黃酮醇-3-O-β-D-葡萄糖苷，還沒有三棱中含有蘆丁成分的文獻報道。因此本實驗采用薄層色譜法對三棱
5、超臨界二氧化碳萃取物中蘆丁進行了鑒定，并利用高效液相色譜法對蘆丁的含量進行測定。 1儀器與材料 1.1儀器與試劑 江蘇南通華安公司的Ha120-50-01型超臨界萃取裝置；島津LC-10ATvp高效液相色譜儀，島津ShimadzuCLASS-VPV6.12SP4工作站；KQ-250B型超聲波清洗器?！ ?.2對照品與供試品 三棱（北京同仁堂集團）；蘆丁對照品（中國生物制品檢定所）；甲醇（分析純）；乙腈（色譜純）；四氫呋喃（色譜純）；枸櫞酸（色譜純）；二氧化碳（99.95%）；本實驗用水均為超純水。 2方法與結果 2.1三棱超臨界提取物中蘆丁的薄層鑒
6、別 2.1.1供試品溶液的制備 三棱生藥粉碎、過40目篩、60℃烘干6h，精確稱1000g過篩的三棱粉，加入180ml夾帶劑，充分混合過夜，然后置于萃取釜中。對萃取釜、解析釜Ⅰ、解析釜Ⅱ分別進行加熱,當溫度分別達到設定溫度時,通過高壓泵對萃取釜和兩個解析釜進行加壓,當壓力分別達到設定壓力后,進行靜態(tài)萃取，之后開始循環(huán)萃取,并保持恒溫和恒壓,CO2流量為40L/h。萃取2h后,從解析釜I和Ⅱ的出料口放出黃色油狀液體,萃取物稱重，量體積，過濾，濾液轉移至100ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻得供試品溶液?！ ?.1.2蘆丁對照品溶液I的制備 精密稱取蘆丁對照品1
7、.0mg，置于50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成0.02mg·ml-1的供試品溶液?！ ?.1.3薄層鑒別 用定量毛細管分別吸取上述對照品溶液I、供試品溶液各20μl，于聚酰胺膜上分別點樣，以80%乙醇作為展開劑，展開，晾干，以1%的三氯化鋁乙醇溶液顯色，置紫外燈下檢視，供試品溶液在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，說明樣品中含有蘆丁成分?！ ?.2三棱超臨界萃取物中蘆丁含量的測定 采用高效液相色譜法測定樣品中蘆丁的含量?！ ?.2.1色譜條件色譜柱：SymmetryC18（250m×4.6nm，5μm）；流動相：乙腈-四氫呋喃-0
8、.2%枸櫞酸（14∶1∶85），柱溫2
