離體蛙心灌流及藥物對心臟影響

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1、離體蛙心灌流及藥物對心臟的影響一、實驗?zāi)康模?、學(xué)習(xí)蛙心灌流方法。2、了解離體心臟的自律性與環(huán)境中各因素變化的關(guān)系，觀察理化因素對蛙心活動的影響。二、實驗對象：蟾蜍三、實驗方法：1、標本制備：取蟾蜍→破壞CNS→固定→剪皮→打開胸腔（暴露胸骨柄，用鑷子把胸骨柄捏起來，用粗剪刀剪斷，沿胸骨將鎖骨剪斷，去除多余的骨頭，注意勿將心臟剪破）→用眼科剪小心剪開心包膜→暴露心臟→在主動脈叉下方穿一根絲線備用→用蛙心夾在心舒張期夾住心尖部→在左側(cè)主動脈分叉處2-3mm處剪一剪口→將盛有一定量任氏液的蛙心插管插入到主

2、動脈球→將插入到主動脈球的套管稍向后退，再向左下逆時針旋轉(zhuǎn)90°，插入心室→結(jié)扎固定→剪斷血管和背面靜脈竇以下組織，游離標本2、連接裝置：蛙心管內(nèi)保持2ml灌流液，用木夾夾住蛙心套管，蛙心夾的線與張力換能器相連，換能器與電腦的相應(yīng)通道相連。3、運行電腦：打開電腦→Medlab→實驗/常用生理實驗→離體蛙心灌流四、實驗結(jié)果：分別觀察正常心臟活動曲線及加入不同溶液后的心臟活動曲線的變化。曲線規(guī)律：心臟節(jié)律；曲線疏密：心率曲線幅度：心室收縮強度；曲線頂點：心室收縮最大強度；曲線基線：心室舒張最大程度順序觀察

3、項目藥量心肌(率、力)變化正常任氏液灌流正常10.65%NaCl灌流22%CaCl21~2d31%KCl1~2d41:10000NA1~2d51:100000ACh1~2d63%LH1~2d2.5%NaHCO32~4d71:100000Isop1ml+任氏液1ml81:1000prop0.2ml+任氏液1.8ml出現(xiàn)效應(yīng)后，抽出一半液體后立即加入Isop1ml五、實驗討論：心肌細胞興奮時，通過興奮-收縮耦聯(lián)機制，觸發(fā)心肌細胞收縮。心肌收縮的特點是：1.對細胞外Ca2+濃度的依賴性高；2.“全或無”式收

4、縮1、0.65%NaCl灌流與正常任氏液相比[Ca2+]↓→Ca2+內(nèi)流↓→興奮-收縮耦聯(lián)↓→收縮力↓2、2%CaCl2（1～2滴）→[Ca2+]↑→Ca2+內(nèi)流↑→興奮-收縮耦聯(lián)↑→收縮力↑舒張期Ca2+與肌鈣蛋白不完全解離，產(chǎn)生Ca2+強直，基線上移。3、1%KCl（1滴）→AP平臺期縮短Ca2+內(nèi)流↓；競爭性結(jié)合肌鈣蛋白→興奮-收縮耦聯(lián)↓→收縮力↓4、NA與心肌β1受體結(jié)合→激活腺苷酸環(huán)化酶→細胞內(nèi)cAMP↑→激活蛋白激酶和細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的磷酸化過程→心肌細胞膜上Ca2+通道開放概率增加→Ca2+

5、內(nèi)流↑肌漿網(wǎng)釋放Ca2+↑→興奮-收縮耦聯(lián)↑→收縮力↑離體：NA→（+）β1-R→HR↑；整體：BP↑→反射性HR↓5、ACh→與心肌M受體結(jié)合→抑制腺苷酸環(huán)化酶→細胞內(nèi)cAMP↓→抑制蛋白激酶和細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的磷酸化過程→心肌細胞膜上Ca2+通道開放概率減少→Ca2+內(nèi)流↓肌漿網(wǎng)釋放Ca2+↓→興奮-收縮耦聯(lián)↓→收縮力↓ACh→與心肌M受體結(jié)合→K+外流↑,Ca2+內(nèi)流↓→細胞內(nèi)[Ca2+]↓→興奮-收縮耦聯(lián)↓→收縮力↓6、3%乳酸→H+與Ca2+競爭肌鈣蛋白，Ca2+不能與肌鈣蛋白結(jié)合→收縮力↓2.

6、5％NaHCO3→中和H+，Ca2+與肌鈣蛋白結(jié)合增加，收縮力恢復(fù)。7、Isop1ml+任氏液1ml與心肌β1受體結(jié)合→激活腺苷酸環(huán)化酶→細胞內(nèi)cAMP↑→激活蛋白激酶和細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的磷酸化過程→心肌細胞膜上Ca2+通道開放概率增加→Ca2+內(nèi)流↑肌漿網(wǎng)釋放Ca2+↑→興奮-收縮耦聯(lián)↑→收縮力↑Prop0.2ml+任氏液1.8ml抑制腺苷酸環(huán)化酶→細胞內(nèi)cAMP↓→抑制蛋白激酶和細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的磷酸化過程→心肌細胞膜上Ca2+通道開放概率減少→Ca2+內(nèi)流↓肌漿網(wǎng)釋放Ca2+↓→興奮-收縮耦聯(lián)↓→收縮力

7、↓出現(xiàn)效應(yīng)后，抽出一半液體后立即加入Isop，與Prop競爭性拮抗→收縮力↑但較前次幅度小。六、實驗結(jié)論：1、心肌的生理功能依靠內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)；2、各種因素對心肌收縮力的影響主要通過Ca2+實現(xiàn)；3、K+、H+、ACh、prop可使心肌收縮力降低；4、Ca2+、NA、Isop、OH-可使心收縮力增強；5、Prop可競爭性拮抗Isop的作用?！咀⒁馐马棥?、套管插入動脈球后，應(yīng)及時進行換液，分別用兩個吸管專管專用，防止蛙心套管下端被凝血塊堵塞。2、插入到心室內(nèi)后，若沒有血液噴出，可將蛙心套管稍向后退，因為有

8、時插入太深抵在心室壁上也會看不到現(xiàn)象。3、結(jié)扎固定時，一定要扎牢，尤其第一道線，扎好以后再在側(cè)面的側(cè)鉤上結(jié)扎固定一下，防止滑脫。4、游離標本時注意切勿損傷靜脈竇，盡量遠離心臟剪。5、連接時，換能器的連線應(yīng)與插管中軸在同一直線上，即與地面垂直。6、做的過程中，隨時用面紙吸去滲出的任氏液，以防滴在換能器上，損壞換能器。7、每次實驗觀察前，應(yīng)使蛙心插管內(nèi)的液面保持在同一高度。8、藥物作用明顯后，應(yīng)立即換洗，直至心臟曲線恢復(fù)正常，再進行下一項實驗。