豬圓環(huán)病毒pcv試劑盒使用方法

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1、豬圓環(huán)病毒（PCV）試劑盒使用方法檢測范圍：96T使用目的：本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中圓環(huán)病毒（PCV）表達。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬圓環(huán)病毒（PCV）表達。用純化的豬圓環(huán)病毒（PCV）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中圓環(huán)病毒（PCV）相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的圓環(huán)病毒（PCV）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm

2、波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中豬圓環(huán)病毒（PCV）的存在與否。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8陽性對照0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9陰性對照0.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融2．不

3、能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜

4、，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.1.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。2.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。操作程序總結：計算和結果判定：試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.1

5、0臨界值（CUTOFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定：樣品OD值<臨界值（CUTOFF）者為豬圓環(huán)病毒（PCV）陰性陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為豬圓環(huán)病毒（PCV）陽性。注意事項1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物請避光保

6、存。6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月