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《豬圓環(huán)抗體pc-ab試劑盒使用方法》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、豬圓環(huán)抗體（PC-Ab）試劑盒使用方法檢測范圍：96T使用目的：本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中圓環(huán)抗體（PC-Ab）表達(dá)。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中豬圓環(huán)抗體（PC-Ab）表達(dá)。用純化的豬圓環(huán)抗原包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中圓環(huán)抗體（PC-Ab）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的圓環(huán)抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下
2、測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬圓環(huán)抗體（PC-Ab）的存在與否。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8陽性對照0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9陰性對照0.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2
3、．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.編號(hào)：將樣品對應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心
4、揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.1.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。2.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算和結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.
5、10臨界值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定：樣品OD值<臨界值（CUTOFF）者為豬圓環(huán)抗體（PC-Ab）陰性陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為豬圓環(huán)抗體（PC-Ab）陽性。注意事項(xiàng)1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6、5．底物請避光保存。6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時(shí)，參考波長為630nm7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月RDHumanHPFORRESEARCHUSEONLY96determinationsPurposeThiskitallowsforthedeterminationofHPconcentrationsinHumanserum,andotherbiologicalfl
7、uids.PrincipleoftheassayThekitassayHPlevelinthesample，usePurifiedHPantibodytocoatmicrotiterplatewells,makesolid-phaseantibody,thenaddHPtowells,CombinedWithHP,afterwashingandremovingnon-combinativeantibodyandothercomponents,thenCombinedHPantibodywhichwithHRP
8、labeledbecomeantibody–antigen-enzyme-antibodycomplex,afterwashingCompletely,AddTMBsubstratesolution,,TMBsubstratebecomesbluecolorAtHRPenzyme-catalyzed,reactionisterminatedbytheadditionofasulphuricacids
