培養(yǎng)基的配制及滅菌

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1、培養(yǎng)基的配制及滅菌一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.三角瓶，培養(yǎng)皿，試劑瓶，試管，槍尖盒等儀器的清洗。2.三角瓶棉塞的制作，三角瓶，吸管，培養(yǎng)皿，試劑瓶，試管，槍尖盒的包裝與滅菌。3.高溫蒸汽滅茼原理的學(xué)習(xí)。4.LB和MacConkey培莽基的制作與滅菌。二.實(shí)驗(yàn)原理1.高溫滅菌的原理：由于培養(yǎng)基配置過程屮并非是無菌操作，所以要通過立即滅菌來防止配制過程屮混入的雜菌利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行繁殖從而破壞培養(yǎng)基的性能。高壓蒸汽滅菌是生物試驗(yàn)應(yīng)用最廣，效采最好的一種濕熱滅菌法。在密閉的蒸鍋內(nèi)，其屮的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而

2、鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.IMPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121°C。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。注意：①使用高壓蒸汽火菌前一定要完全排除鍋A空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。否則在同一壓力K,鍋內(nèi)實(shí)際溫度和理想溫度就會(huì)宥差跑，不能達(dá)到最好滅菌效果。②在使用滅菌鍋前切勿忘記加水，水加至與三角擱架和平，以防滅尚鍋燒干而引起炸裂事故。③使用完后要等到壓力降為零再打開鍋蓋，否則會(huì)岡為鍋內(nèi)外壓力不平衡而導(dǎo)致棉塞蹦出造成污染，也容易傷害到操作者。2.培養(yǎng)基的配置原理：微生物的生K依賴于可利用的營養(yǎng)物質(zhì)和適宜的

3、生長環(huán)境。培養(yǎng)基是用于培養(yǎng)，轉(zhuǎn)移，貯存微生物的固體，半固體或液體的營養(yǎng)物質(zhì)。培養(yǎng)基屮含有微生物所需的全部營養(yǎng)物質(zhì)，包括碳源、氮源、能源、無機(jī)鹽、水分和生長因子。適宜的pll對(duì)微生物的生長是必不可少的。培養(yǎng)基的物理狀態(tài)冇三種：液體、半固體和固體。這些培養(yǎng)基的主要區(qū)別是在閥體和半固體培養(yǎng)基里面加了固化劑瓊脂。當(dāng)將瓊脂加入溶液巾時(shí)，在98°C能融化成有一定粘性的液體。并在42°C凝固。瓊脂具有的特性有：不易被微生物降解；接近無色等。對(duì)于固體培養(yǎng)基需要加入瓊脂量約為半固體培養(yǎng)基加入約0.6%、.8%。培養(yǎng)基在配制過程屮容舄受到污染，因此

4、必須進(jìn)行滅菌，同時(shí)不能將培養(yǎng)基屮的營養(yǎng)物質(zhì)破壞。三.實(shí)驗(yàn)材料1.培養(yǎng)基與試劑：蛋白胨，酵母粉，NaCl固體，NaOH液體，瓊脂，MacConkey。2.儀器：三角瓶，培養(yǎng)皿，試劑瓶，試管，槍尖盒，電子稱，高壓蒸汽鍋，電爐，藥匙，稱量紙，量筒或搪瓷缸，燒杯，pH試紙。一.實(shí)驗(yàn)步驟1.儀器的清洗：①試劑瓶：自來水洗凈，蒸餾水洗兩遍，重蒸水洗兩遍。②三角瓶：a來水洗凈，蒸餾水洗兩遍，瀝干。③培養(yǎng)皿：自來水洗凈，瀝干。④試管和吸管：自來水洗凈，瀝干。⑤槍尖盒：自來水洗凈，蒸餾水洗兩遍，瀝干。2.①棉塞的制作：先取紗布，取紗布時(shí)確定紗布寬

5、度后抽掉一根線，然后順著先的方向撕紗布，再根據(jù)紗布的寬度和所撕下來的訟度剪下大約為正方形的紗布三片，用于包棉花。根據(jù)三角瓶的U徑大小，撕取大小適宜的棉花，棉花的完整面跟紗布接觸，棉花碎片A里。將紗布正至于三角瓶口，再降棉花內(nèi)側(cè)用大拇指頂成窩狀，向紗布塞棉花，大約三分之二處在管口內(nèi)，然?再用紗布的四個(gè)角系住蓬松的棉花，使其成圓形。保證取出棉塞的時(shí)候可以聽到“噗”一聲。②三角瓶U,試劑瓶瓶口的包裝：剪下大約正方形的牛皮紙抱住三角瓶U或試劑瓶瓶口，用繩+緊繞幾圈，然后沿著繩子自身纏繞方H擰斷繩子，系緊后包裝完畢。③吸管及涂布器的包裝：

6、吸管的尾部要塞棉花，包裝的時(shí)候從頭部開始。注意裝角度不要太大也不要太小。（30°"45°最好。角度太小氈裝不緊，太大浪費(fèi)紙），包裝完后將尾巴打結(jié)。六只吸管捆扎在一起，做好標(biāo)記后高壓。高壓后從尾巴打開。涂布器的包裝與吸管類似。④培養(yǎng)皿的包裝:將培養(yǎng)皿10個(gè)擺成一排，保證每個(gè)皿的皿蓋和皿身方向一致。用牛皮紙包扎的時(shí)候隨時(shí)將兩側(cè)封口。滾動(dòng)包裝完后確保拋擲時(shí)培養(yǎng)m.不會(huì)散開。⑤槍尖盒的包裝：方法同禮盒的包裝。⑥試管的包裝：在每只試管里面加入4.5mL蒸餾水，塞上橡膠塞，將六只試管捆扎在一起，試管I」處用牛皮紙包好?用橡皮筋捆住。2.高壓

7、滅菌處理（老師講過但并未動(dòng)手操作）：①將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。②放回A層鍋，并裝入待火蔭，物品裝入待火菌物品的時(shí)候注意不要裝得太擠，以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果。③加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊和對(duì)的W個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。④通電加熱，并同吋打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋PJ的溫度隨蒸汽壓力増加而逐漸上升。設(shè)置溫度12PC,等待滅菌完畢。⑤當(dāng)壓力表的壓力降至“0”時(shí)，打幵排氣閥，旋松螺栓

8、，打開蓋子，取出滅菌物品。3.培養(yǎng)基的配制及滅菌：配方稱量配制調(diào)pH值過濾（可省）分裝滅菌1）LB培養(yǎng)基的配制：①配方：LB液體培養(yǎng)基：1%蛋白胨，0.5%酵母粉，l%NaCl,用NaOH調(diào)pH至7.2,121°C滅菌20min備用。LB固體培養(yǎng)基：除以上LB培