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《培養(yǎng)基的配制 、滅菌.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、玉米粉紅糖培養(yǎng)基的配制、滅菌果蠅以酵母菌為食，常采用發(fā)酵的培養(yǎng)基繁殖酵母菌來(lái)飼養(yǎng)果蠅。培養(yǎng)基常用玉米粉、米粉或香蕉配制，本實(shí)驗(yàn)采用玉米粉紅糖培養(yǎng)基，其配方如下：1果蠅培養(yǎng)基成分水1000ml玉米粉105g紅糖75g瓊脂7.5-10g苯甲酸0.75g酵母粉5-10g酒精10ml2配制方法1.稱(chēng)取藥品：按照配方依次稱(chēng)取瓊脂條、紅糖、玉米粉、苯甲酸。2.加熱促溶：將1L水分成兩份：一份用于加熱溶解瓊脂和糖，另一份煮玉米粉，玉米粉要先用冷水?dāng)嚢?，再緩慢加到煮沸瓊脂紅糖溶液中，邊倒邊攪拌，注意防止燒焦。繼續(xù)煮15-20分鐘，關(guān)掉火后再加入苯甲
2、酸(用少量酒精促溶)，繼續(xù)攪拌。3.分裝：將培養(yǎng)基分裝到試管或三角瓶，試管內(nèi)培養(yǎng)基厚度為1-2cm，三角瓶培養(yǎng)基厚度為2-3cm，用紙把瓶口擦干凈，加上棉塞，外圍用牛皮紙和棉線(xiàn)包扎。34.滅菌：置121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘。5.培養(yǎng)酵母菌：待培養(yǎng)基冷卻后，在培養(yǎng)基的表面滴加1-2滴新鮮酵母液，放置1d待培養(yǎng)基表面干燥后再接種果蠅。6.接種果蠅：拔出接種瓶、親本瓶的棉塞，夾在指縫中間，迅速將親本瓶口倒扣在接種瓶上方，輕拍親本瓶讓果蠅落入接種瓶中，此法僅適用于原種繼代培養(yǎng)。如要挑取處女蠅、不同品種雜交、子代性狀檢查，需要先做麻醉處理，
3、有選擇性轉(zhuǎn)入接種瓶。4高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法是將物品放在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)0.1MPa，121℃保持15～30分鐘進(jìn)行滅菌。時(shí)間的長(zhǎng)短可根據(jù)滅菌物品種類(lèi)和數(shù)量的不同而有所變化，以達(dá)到徹底滅菌為準(zhǔn)。這種滅菌適用于培養(yǎng)基、工作服、橡皮物品等的滅菌，也可以用于玻璃器皿的滅菌。高壓蒸汽滅菌的基本原理：將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過(guò)加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度
4、。最終導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。5一般培養(yǎng)基用0.1MPa(相當(dāng)于15Ib/in2或1.05kg/cm2)，121.5℃，15～30min可達(dá)到徹底滅菌的目的。滅菌的溫度及維持的時(shí)間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體情況而有所改變。在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒羝呐蛎泬?，所以，?dāng)水蒸汽中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。6手提式高壓蒸汽滅菌鍋的操作步驟1)首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。2)放回
5、滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。3)加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以?xún)蓛蓪?duì)稱(chēng)的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。74)用電爐或煤氣加熱，并同時(shí)打開(kāi)排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。5)滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表
6、的壓力降至0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。86)將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，經(jīng)檢查若無(wú)雜菌生長(zhǎng)，即可待用。注意事項(xiàng)：1)每次使用前一定要檢查水位，添加適量水。2)鍋內(nèi)冷空氣必須排干凈，否則影響滅菌溫度。910
