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《影響elisa試驗“花板”的因素及排除措施》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、影響ELISA試驗“花板”的因素及排除措施新疆庫爾勒市疾病預防控制中心841000ELISA試驗以其靈敏度高、特異性好、操作簡便、可大批量操作等特點而廣泛應用于各種傳染性疾病、腫瘤標志物及激素等項目的檢測［1］，優(yōu)質(zhì)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證EUSA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，就易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽性等現(xiàn)象。所謂“花板”，指在所有標木進行檢測的過程中，所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態(tài)，步驟均按各種試劑說明書的要求去操作，排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結(jié)果的影響外，
2、試劑盒內(nèi)的空白、陰性和陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控值都很正常，只有檢測的血液標木情況異常，標木孔的吸光度（OD值）明顯偏高、弱陽性結(jié)果岀現(xiàn)較多的現(xiàn)象。這種現(xiàn)象對檢驗結(jié)果的正常判斷造成了很大的影響，權威數(shù)據(jù)報告陽性率不應該是很高的情況下，復查后出現(xiàn)“花板”問題的標木基木上仍是陰性。因此，如何避免“花板”的產(chǎn)生，先要找出造成“花板”的原因是關鍵。ELISA試驗操作并不復雜，但影響試驗結(jié)果的因素卻很多。為了避免“花板”問題的出現(xiàn)，降低檢測的假陽性率，獲得更理想的實驗結(jié)果，同時為了節(jié)約試劑避免不必要的浪費，首先在選擇ELISA試劑時，應選擇靈敏度高、特異
3、性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便省時的優(yōu)良檢測試劑，國家參比實驗室每年對各廠家的試劑進行質(zhì)量評估并定期公布評估結(jié)果，可作為選擇試劑的主要依據(jù)，保證試劑來源可靠，效期內(nèi)使用，不同廠家或批次的試劑不能混用。其次，在標木因素、操作因素、邊緣效應等方面要注意以下幾點。1標木因素標木的采集和處理不規(guī)范，嚴重溶血或血脂的標木，使待測血清中混有紅細胞或纖維蛋白原，這兩種物質(zhì)易沉淀或附著在酶標板聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈,所以樣本的采集及血清分離中要注意避免溶血、血脂、細菌污染，有溶血、混濁或絮狀物吋，應自然放置l-2h或37°C水浴放置lOmin，使血液充分
4、凝固收縮，然后適當加強離心速度，延長離心吋間（3000r/min離心15min）,使血細胞和纖維蛋白充分沉淀，血細胞與血清徹底分離后取上清檢測，讓標本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽性率降至最低。奮資料表明，離心轉(zhuǎn)速越高，離心吋間越長，標本得到充分離心后，可有效避免“花板”的出現(xiàn)[2]2操作因素2.1加樣加標本吋盡量避免交叉污染。如盛標本的試管周圍常有血痂,易脫落，應遠離酶標板；加樣太快，無法保證加樣的準確性和均一性，加在孔壁上部的非包被區(qū)，也易導致非特異性吸附而出現(xiàn)“花板”。2.2溫育因樣本過多，加樣后未及時放入溫育箱或溫育后洗板機來不及及吋
5、洗板，導致反應板在室溫放置吋間過長，人為間接增加了反應吋間，致蛋白質(zhì)非特異吸附于固相載體，導致非特異性結(jié)合，難以清洗造成“花板”，因此要嚴格控制加樣吋間，樣本較多吋應分批操作。封板溫育吋，各孔一定要封嚴，防止陽性標本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象導致“花板”。反應板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確，溫度過高也易造成“花板”。由于廠家的試劑盒溫育是在空氣浴中完成，采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應，邊上的值會偏高，建議為了客觀的判斷結(jié)果，將質(zhì)控放在非邊緣位置。96孔酶標板結(jié)構(gòu)特別，易產(chǎn)
6、生邊緣效應，酶標板周圍與內(nèi)部孔升降溫速率不同，易造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異。干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均,貼密封膜，防止污物浸入。2.3洗滌如果酶標板質(zhì)量差，結(jié)合不均勻造成包板不均勻易致“花板”；酶標板的材料聚苯乙烯因其具冇較強的吸附蛋白質(zhì)的性能而被廣泛用于ELISA試驗的固相載體，但聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，它既能吸附特異性蛋白質(zhì)，也能吸附非特異性蛋白質(zhì)，所以需要在洗滌吋把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來，通過洗滌來清除反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)，洗滌在ELI
7、SA實驗過程中雖不是一個反應步驟，但卻決定著試驗的成敗。如對高IgG血癥的血液中存在的非特異性IgG,操作者很難在加樣時將其去除，解決的最佳時機就是洗滌［3】。手洗：手工洗板吋前3次注洗液后應立即棄去，后幾次再設定浸泡時間，可減少交叉污染或花板、跳孔；洗板完畢拍板吋用干凈合適的吸水紙巾，不要把無關物質(zhì)拍進板孔，并盡量不要在同位置拍，以免交叉污染。注意洗液量既不能過少出現(xiàn)邊緣效應，也不能過滿造成孔與孔之間液體溢出連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。機洗：要求板要平整，洗板機洗板過程中，往往是數(shù)排一起洗，如果板不平，就容易造成洗液有殘留，對結(jié)果造成干
8、擾；嚴重血脂、凝血或污染的標本易造成洗板機加液頭堵塞或針口冇纖維蛋白和異物，導致在洗板的過程中產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導致“花板”，因此要勤疏通加液頭，使洗板吋每孔均注滿洗液，吸液時殘留量要盡可能少。洗
