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《elisa試驗(yàn)的影響因素分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、ELISA試驗(yàn)的影響因素分析謝強(qiáng)，肖傳宇，陶峰，謝守風(fēng)，邱淑俊，李雪蓮，[摘要]ELISA試驗(yàn)是將待測(cè)抗原或抗體先固定于固相載體表而，再用酶標(biāo)記的抗原或抗體與已被固定的相應(yīng)抗體或抗原發(fā)生特異性反應(yīng)，加入酶底物及色原后顯色，，顯色程度與待測(cè)抗原或抗體量呈相關(guān)性L該試驗(yàn)因其特異性、敏感性、操作簡(jiǎn)便己廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)屮，但由于該試驗(yàn)手工操作步驟較多，很多因素都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。現(xiàn)將平時(shí)工作屮一些常見(jiàn)的影響因素分析如下：[關(guān)鍵詞]標(biāo)本；試劑；加樣；溫浴;洗滌[abstract]ELISAtestisfortheantigenorantibodyfixedonthesur
2、faceofthesolidphasecarrierfirst，andthenandenzymelabeledantigenorantibodyhasbeenfixedtothecorrespondingantibodyorantigenspecificityreaction,addingenzymesubstratesandaftertheoriginalcolorofcolor，andthedegreeofcolorandquantityofantigenorantibodyundertestis1.Thetrialbecauseofitsspecificity，
3、sensitivity,simpleoperationhasbeenwidelyusedinlabroutinetests，butasaresultofthetestmanualoperationstepismore，manyfactorswillaffectthetestresults.Willnowworkatordinarytimessomeofthecommoninfluencefactorsintheanalysisareasfollows:[keywords]sample;reagent;Addthesample;warmbath;wash一、標(biāo)本的因素血
4、清和血漿均可以用于檢測(cè)，但血清的分離應(yīng)在抽血后等血液完全凝固后再離心，以防止因纖維蛋白對(duì)洗板機(jī)的影響。而肝素抗凝血漿可立即離心測(cè)定，但有文獻(xiàn)報(bào)道肝素抗凝血假陽(yáng)性率明顯高于未抗凝血。故我們認(rèn)為還是用血清測(cè)定較好。同時(shí)，溶血是巾丁?紅細(xì)胞破裂引起的，血細(xì)胞成分血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶特性，釋放到血漿或血清屮，會(huì)催化底物而造成假陽(yáng)性，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響很復(fù)雜2。乳糜血清屮乳糜顆粒增多，會(huì)引起血清粘稠度加大，使分子運(yùn)動(dòng)速度減慢，減少了抗原、抗體結(jié)合的幾率3,但實(shí)驗(yàn)證明，乳糜血清對(duì)ELISA試驗(yàn)的檢驗(yàn)結(jié)果無(wú)明顯影響。二、試劑的因素選擇試劑時(shí)應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好，批間差
5、小、操作方便的試劑。不同廠家的試劑不能浞用，包括底物和洗滌液。檢測(cè)前應(yīng)將試劑放置室溫平衡半小時(shí)，洗滌液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，同時(shí)觀察濃縮洗滌液屮有無(wú)結(jié)晶，若有結(jié)晶應(yīng)放37°C水浴屮融化后方可使用。加入底物TMB時(shí)應(yīng)注意有無(wú)顏色變化，若己顯色則可能過(guò)期或變質(zhì)，也不可使用。三、技術(shù)人員操作的因素加樣U的準(zhǔn)確與否，直接影響抗原抗體結(jié)合物的濃度，直至最后顯色的深淺。吸咀插入血清不可太深，若插入太深，吸咀外壁可能粘連太多血清，輕微的抖動(dòng)動(dòng)即可將吸咀外壁的血清濺入某它包被孔屮，造成交義污染。加樣時(shí)應(yīng)盡可能的垂直加樣，并加在包被孔的底部，不可加在孔的上部。實(shí)際工作屮我們會(huì)發(fā)現(xiàn)，用滴瓶加酶和底
6、物時(shí)，速度過(guò)快，有時(shí)會(huì)加兩滴或加在兩孔之間，所以操作時(shí)速度應(yīng)適屮，不可為了追求速度而不顧質(zhì):W:。標(biāo)本量大時(shí)，可考慮使用排槍加試劑，可提高速度，但使用排槍時(shí)應(yīng)注意吸咀一定要裝好,不可松動(dòng)，否則會(huì)影響加樣量的準(zhǔn)確度。四、加樣時(shí)間間隔對(duì)結(jié)果的影響在競(jìng)爭(zhēng)抑制法試驗(yàn)中，理論上應(yīng)該是標(biāo)本與酶標(biāo)抗體混合后同吋加入反應(yīng)孔，若標(biāo)本先于酶標(biāo)抗體加入反應(yīng)孔，則標(biāo)本會(huì)先與包被抗體進(jìn)行反應(yīng)，造成特異性假陽(yáng)性。若是有干擾物質(zhì)存在吋表現(xiàn)明顯，在公平條件下，干擾物質(zhì)與包被抗體的結(jié)合能力會(huì)低于標(biāo)本，而在非公平條件下，干擾物質(zhì)會(huì)優(yōu)先與包被抗體進(jìn)行結(jié)合，出現(xiàn)假陽(yáng)性4。本人在工作屮也發(fā)現(xiàn)，作HBcAb項(xiàng)目
7、時(shí)，若標(biāo)木與酶加樣時(shí)間間隔太長(zhǎng)，會(huì)引起吸光度的趨勢(shì)性變化。會(huì)造成吸光度的降低。特別是針對(duì)臨界伉標(biāo)本，fli現(xiàn)假陽(yáng)性。五、溫浴的因素使用水浴箱作為溫浴設(shè)備時(shí)，應(yīng)注意水的深淺對(duì)結(jié)果的影響，當(dāng)水浴箱屮水的的實(shí)測(cè)溫度37°C時(shí)，則水而溫度可能只有34°C,空氣溫度更低，甚至只有二十多度，所以當(dāng)水浴箱屮水位過(guò)低時(shí)則酶標(biāo)板微孔沒(méi)有浸入水屮，則反應(yīng)溫度會(huì)達(dá)不到37°C,相應(yīng)的就會(huì)影響酶促反應(yīng)。為防止邊緣效應(yīng)，酶標(biāo)板應(yīng)盡量浸入水屮，以保證受熱的均勻。水浴時(shí)，酶標(biāo)板應(yīng)封好，以免水滴滴入包被孔中，或陽(yáng)性標(biāo)本的蒸發(fā)。嚴(yán)格掌握溫浴時(shí)間，不可為了早點(diǎn)出結(jié)果擠自縮短溫浴時(shí)間。有
