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1、HPLC法測(cè)定丹參脂溶性成分的含量【關(guān)鍵詞】丹參脂溶性成分HPLC質(zhì)量控制【Abstract】ByusingHPLCtechnology，thispaperestablishedarapidandreliableHPLCmethodforsimultaneousdeterminationofmaintanshinonesofSalviamiltiorrhiza．Fourtanshinonesn(4．6mm×250mm，5μm)．Agredientelutionedbyusingmethanol-obilephase
2、．ThefloL•min-1．TheRSDoftherepeatabilityethodisrapid，easilyoperated，reliableandcouldbeusedforthequalitycontrolofSalviamiltiorrhiza．【Keystation色譜工作站)。1.2試藥丹參酮I、丹參酮IIA對(duì)照品購自中國生物藥品檢驗(yàn)所，二氫丹參酮、隱丹參酮對(duì)照品購自長沙上河生物科技有限公司。甲醇、乙腈為色譜純(美國Merck公司)，丹參藥材購自安徽亳州中藥材市場(chǎng)。1.3試液制備1.3
3、.1對(duì)照品貯備液:取對(duì)照品二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA適量，精密稱定，加入甲醇制成對(duì)照品混合液，即得。1.3.2供試品溶液的制備:取丹參5g，加入甲醇50mL，超聲處理30min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，微孔濾膜濾過即得。1.4色譜分析條件色譜柱:AgilentZorbaxSB-C18色譜柱(4.6×250mm,5μm，Agilent公司)，流動(dòng)相A為0.1%乙酸溶液，流動(dòng)相B為乙腈，梯度洗脫：0-5min時(shí)65%B，10～30min時(shí)70%B，40min時(shí)95%B，流速1.0mL/min
4、，柱溫35℃，檢測(cè)波長280nm，進(jìn)樣量20μL。2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論2.1線性關(guān)系考察逐級(jí)稀釋對(duì)照品儲(chǔ)備液1-100倍得到8個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液，按1.4項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線，計(jì)算各對(duì)照品的回歸方程，見表1。表1四種丹參脂溶性成分線性回歸方程2.3重復(fù)性試驗(yàn)按1.3.2項(xiàng)下方法制備同一批供試品溶液5份，計(jì)算每克丹參藥材中各成分含量。二氫丹參酮含量0.74mg•g-1，RSD1.86%;隱丹參酮含量1.34mg•g-1，RSD1.32
5、%;丹參酮I含量3.23mg•g-1，RSD1.03%;丹參酮IIA含量1.75mg•g-1，RSD0.89%。2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)按1.3.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按1.4項(xiàng)下色譜條件連續(xù)7天內(nèi)進(jìn)樣測(cè)定，每天連續(xù)進(jìn)樣3次，測(cè)定峰面積，計(jì)算二氫丹參酮RSD1.42%，隱丹參酮RSD0.95%，丹參酮I的RSD0.93%，丹參酮IIA的RSD0.77%，表明樣品溶液至少在一周內(nèi)穩(wěn)定。2.5加樣回收試驗(yàn)配制二氫丹參酮0.253mg•mL-1、隱丹參酮0.469mgmL-1、丹參酮I1.
6、012mg•mL-1、丹參酮IIA0.778mgmL-1的對(duì)照品溶液10mL。分別精確量取0.8，1.0，1.2mL的對(duì)照品溶液各3份于錐形瓶中，揮干，每份加入精密量取丹參藥材粉末約2g，混合均勻，精密加入25mL甲醇，按1.3.2項(xiàng)下方法制得供試品。按1.4項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行HPLC分析，每個(gè)樣品進(jìn)樣3次，計(jì)算平均加樣回收率。各物質(zhì)平均加樣回收率分布在98.3%-101.6%之間，符合檢測(cè)要求。2.6樣品測(cè)定結(jié)果取丹參藥材，粉碎過篩，按1.3.2項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液各5批，按1.4項(xiàng)色譜條件分析，
7、每個(gè)樣品進(jìn)樣3次，計(jì)算1g丹參藥材中二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA的含量分別為0.71mg•g-1、1.32mg•g-1、3.34mg•g-1、1.70mg•g-1。3 討論與結(jié)論本研究對(duì)丹參脂溶性成分的提取方法做了比較分析，分別采用了回流法、滲漉法、冷浸法、超聲法、超臨界萃取法，結(jié)果顯示超聲法操作簡(jiǎn)便、提取效率高，因此最終采用該法作為脂溶性成分的提取方法。本研究采用HPLC技術(shù)對(duì)丹參藥材中脂溶性成分進(jìn)行了鑒定和含量測(cè)定分析，研究結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)所確立的方
8、法準(zhǔn)確可靠、操作簡(jiǎn)單、快速，檢測(cè)范圍全面，有利于提高丹參藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，維持原藥材的質(zhì)量穩(wěn)定性和用藥安全性，值得進(jìn)一步推廣。參考文獻(xiàn)[1]曹芝君,邱德凱,沈敏,陳穎.重組肝再生增強(qiáng)因子、苦參素和丹參對(duì)肝臟星形細(xì)胞株IG12的作用[J].上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002,22(6):501-504.[2]邵泉,趙浩亮,苗青旺,等.肝硬變大鼠肝部分切除術(shù)后肝再
