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1、分化抑制因子NDPK【關(guān)鍵詞】白血病【摘要】目的研究分化抑制因子―――核苷二磷酸激酶A（NDPK-A）在血清中的含量及其與血液病的相關(guān)性，探討血清NDPK-A含量檢測(cè)對(duì)于血液病診斷和療效判斷的意義。方法應(yīng)用重組NDPK-A標(biāo)準(zhǔn)品及相應(yīng)抗體建立雙抗體夾心ELISA法測(cè)定NDPK-A含量，應(yīng)用此方法測(cè)定正常人和血液病患者血清NDPK-A含量。結(jié)果30例正常人血清NDPK-A含量為（4.22±0.45）μg/L，26例白血病患者血清NDPK-A含量為（21.07±12.03）μg/L，9例淋巴瘤患者血清NDPK-A
2、含量為（32.31±8.75）μg/L，8例骨髓瘤患者血清NDPK-A含量為（14.80±5.87）μg/L。白血病患者治療前后血清NDPK-A含量差異顯著，14例治療前患者NDPK-A含量為（31.25±10.35）μg/L，治療后患者NDPK-A含量為（12.17±4.16）μg/L。結(jié)論建立的雙夾心ELISA法可以靈敏、準(zhǔn)確地測(cè)定血清NDPK-A含量;NDPK-A含量檢測(cè)可發(fā)展為白血病的早期診斷和療效判斷指標(biāo)。關(guān)鍵詞核苷二磷酸激酶A白血病雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法.【Abstract】Objectiv
3、eToinvestigatetherelationshipbetNDPK-Alevelandthedevelopmentofleukemia，andthesignificanceofNDPK-Adeterminationinleukemiadiagnosis.MethodsAsandanNDPK-Aanditsantibodies，ployedtodetectserumNDPK-Aconcentrationinhealthypeopleandpatientsatologicalmalignancies.Res
4、ultsSerumNDPK-Aconcentrationong30healthyvolunteers.Itong26leukemiapatients，and32.31±8.75μg/Lamong9lymphomapatients，and14.80±5.96μg/Lamong8myelomapatients.Furthermore，thereiapatients.SerumNDPK-Aconcentrationong14untreatedpatients，and12.17±4.16μg/Lamong12trea
5、tedpatients.ConclusionTheELISAusedhereple，sensitiveandaccuratefordeterminationofserumNDPK-Alevel，ightbedevelopedintoanearlydiagnosisandprognosticfactorofleukemia.KeyiaELISA核苷二磷酸激酶A（NDPK-A）是抑癌基因nm23-H1的編碼產(chǎn)物，除了能夠催化NDP和NTP之間的磷酸基轉(zhuǎn)移反應(yīng)外，還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、發(fā)育和凋亡［1，2］。多項(xiàng)
6、研究表明，NDPK-A的表達(dá)量與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能呈負(fù)相關(guān)，這一關(guān)系在肺癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌等惡性腫瘤患者中尤為明顯［3，4］。另外，NDPK-A可以抑制血細(xì)胞分化，最近有研究報(bào)道，血清NDPK-A含量與白血病的預(yù)后相關(guān)，高NDPK-A含量的白血病患者預(yù)后差［5，6］。為了探討血清NDPK-A含量檢測(cè)對(duì)于白血病早期診斷和療效判斷的意義，筆者建立了血清NDPK-A含量雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法，并檢測(cè)了部分血樣，現(xiàn)報(bào)告如下。1材料與方法1.1主要儀器酶標(biāo)儀（芬蘭Labsystem公司K-3）1.2
7、主要試劑鼠抗人NDPK-A單克隆抗體購(gòu)自日本SEikagakuKogyo公司，兔抗NDPK-A多克隆抗體購(gòu)自SantaCruz公司，HRP標(biāo)記的抗兔IgG抗體購(gòu)自華美生物工程公司;重組人NDPK-A標(biāo)準(zhǔn)品由日本Toho大學(xué)醫(yī)學(xué)院YoshioHonma教授惠贈(zèng);正常人混合血清、白血病患者血清參考品由本室制備。制備試劑盒所用小牛血清、Tin，洗板后加入酶標(biāo)抗抗體，37℃孵育1h，加入底物TMB，37℃顯色15min，2mol/LH2SO4終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀測(cè)定A450/630，同時(shí)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算各血樣中NDPK
8、-A含量。2結(jié)果2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線rhNDPK-A標(biāo)準(zhǔn)品以生理鹽水倍比稀釋，濃度自1.5625～3200mg/L，共12份，平行條件測(cè)定各份標(biāo)準(zhǔn)品的光密度。取均值進(jìn)行曲線擬合，結(jié)果如圖1中對(duì)數(shù)刻度標(biāo)準(zhǔn)曲線所示。曲線擬合結(jié)果表明，在3.125～3200mg/L范圍內(nèi)，NDPK-A含量與光密度有極好的相關(guān)性（y=a+bx+cx2，s=0.0154，R2=0.997）。2.2方法的穩(wěn)定性rhNDPK-A標(biāo)準(zhǔn)品
