缺血預(yù)處理對心肌梗死大鼠心肌肝細(xì)胞生長因子表達(dá)的影響

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1、缺血預(yù)處理對心肌梗死大鼠心肌肝細(xì)胞生長因子表達(dá)的影響：邢邯英李曉慧野戰(zhàn)鷹趙曉云張萍【摘要】目的通過觀察大鼠心肌梗死和遠(yuǎn)距缺血預(yù)處理后缺血心肌中肝細(xì)胞生長因子(HGF)基因表達(dá)的變化，探討HGF在遠(yuǎn)距缺血預(yù)處理中的作用。方法實(shí)驗(yàn)分組：①急性心肌梗死組;②下肢缺血預(yù)適應(yīng)組：夾閉雙側(cè)股動脈后再灌注，重復(fù)4次后結(jié)扎左前降支。③腎缺血預(yù)適應(yīng)組：夾閉雙側(cè)腎動脈再灌注，重復(fù)3次后結(jié)扎左前降支。④正常對照組。用evansTTC染色法區(qū)分梗死區(qū)和缺血區(qū)心肌，切取梗死區(qū)心肌及缺血區(qū)心肌并稱重。用RTPCR法檢測大鼠缺血區(qū)心肌HGFmRNA表達(dá)。結(jié)果除了正常對照組外其他三組缺血程度無明顯差異;而

2、腎缺血預(yù)處理組心肌梗死程度(46.18%±6.15%)、下肢缺血預(yù)處理組梗死程度(46.92%±6.69%)較急性心肌梗死組(66.44%±13.68%)相比均降低約30%(P<0.05)。腎缺血預(yù)處理組及下肢缺血預(yù)處理組4、6、12hHGFmRNA表達(dá)較急性心梗組各時間點(diǎn)降低(P<0.01)。結(jié)論提示HGF可能是遠(yuǎn)距缺血預(yù)處理減少梗死區(qū)面積的機(jī)制之一?！娟P(guān)鍵詞】急性心肌梗死;缺血預(yù)處理;肝細(xì)胞生長因子1996年Gho等發(fā)現(xiàn)將小腸或腎臟缺血15min對閉塞冠脈60min的心肌有保護(hù)作用，可顯著縮小心肌梗死的面積。他們把這種保護(hù)作用稱為遠(yuǎn)端缺血預(yù)處理〔1〕。尋找遠(yuǎn)端缺

3、血預(yù)處理過程中關(guān)鍵性的引起心肌保護(hù)作用的內(nèi)源性物質(zhì)可能對預(yù)防和治療心肌梗死有重要的意義。肝細(xì)胞生長因子(HepatocyteGroerase)購自美國Promega公司;HGF及βactin引物由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成?！　?.2實(shí)驗(yàn)方法　　1.2.1動物模型的建立采用大鼠心臟冠狀動脈左前降支結(jié)扎法〔2〕制作心肌梗死模型：大鼠稱重、麻醉后仰位固定，記錄標(biāo)準(zhǔn)6導(dǎo)聯(lián)心電圖。氣管插管，接小動物呼吸機(jī)。沿大鼠左側(cè)第三、四肋間作一縱切口約1cm，逐層打開胸壁，撕開心包，暴露心臟，在左心耳與肺動脈圓錐之間平左心耳下緣約3cm處結(jié)扎冠狀動脈左前降支，術(shù)畢逐層關(guān)胸。大鼠有自主呼吸后

4、拔除氣管內(nèi)插管。以結(jié)扎線以下心肌顏色變暗及結(jié)扎冠脈20min內(nèi)心電圖ST段、T波進(jìn)行性抬高為成功結(jié)扎的指標(biāo)。　　1.2.2實(shí)驗(yàn)分組大鼠隨機(jī)分為3組：①急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction，AMI)組：結(jié)扎冠狀動脈左前降支制作AMI模型;②腎臟缺血預(yù)適應(yīng)(renalischemicpreconditioning，RIP)組：大鼠仰臥位,腹正中切口,游離腎蒂,分離雙側(cè)腎動脈，用無損傷動脈夾夾閉雙側(cè)腎動脈,夾閉5min，開放5min，共3個循環(huán)〔3〕。隨后進(jìn)行冠狀動脈左前降支結(jié)扎復(fù)制AMI模型;③下肢缺血預(yù)處理(limbischemicpreconditi

5、oning，LIP)組：鈍性分離雙側(cè)股動脈，用動脈夾夾閉雙側(cè)股動脈5min，開放5min〔4〕，共4個循環(huán)。隨后進(jìn)行結(jié)扎、復(fù)制AMI模型。④正常對照組：未作任何處理。除正常對照組外均在操作結(jié)束后2、4、6、12h處死大鼠。保證每組成功實(shí)驗(yàn)動物例數(shù)為8例?！　?.2.3伊文思三苯基氯化四氮唑(evansTTC)雙染色法測定梗死程度〔5〕在結(jié)扎左冠狀動脈12h后，重新麻醉大鼠，固定，開胸，用止血鉗鉗夾升主動脈，由主動脈根部逆行注入1%伊文思藍(lán)，正常心肌為藍(lán)色，缺血區(qū)為蒼白色。等缺血區(qū)明顯后，將心臟取出，于生理鹽水中沖洗，并剪去心房和右室，濾紙吸干表面水分，置-20℃凍存。0.5

6、h后取出，沿心肌橫軸切5～6片，放入2%TTC中，37℃孵育30min?？梢姶婊钚募”蝗境伤{(lán)色，缺血心肌為磚紅色，梗死心肌為蒼白色。仔細(xì)分離以上三種心肌，用電子天平稱重，分別進(jìn)行記錄。計(jì)算梗死心肌與缺血心肌和梗死心肌之和的重量百分比來表示梗死程度，同時計(jì)算缺血區(qū)心肌占左室心肌百分比來表示心肌缺血程度?！　?.2.4RTPCR法測心肌組織HGF基因表達(dá)取各組大鼠結(jié)扎線下缺血區(qū)心肌100mg，液氮中速凍，-80℃冰箱保存待用。Trizol一步法提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄后行HGF和內(nèi)參照βactin基因的PCR擴(kuò)增。HGF引物序列：上游5′gagccagacgctagcaagtt

7、3′，編號CI組相比其缺血程度無明顯差異(P>0.05);而RIP組心肌梗死程度(46.18%±6.15%)、LIP組梗死程度(46.92%±6.69%)較AMI組(66.44%±13.68%)相比均降低大約30%，降低有明顯差異(P<0.05)。RIP組、LIP組梗死程度相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?！　?.2心肌組織HGF基因表達(dá)AMI組隨時間延長HGFmRNA表達(dá)(1h:0.52±0.12;2h：0.56±0.18;4h：0.61±0.16;6h:0.68±0