論文實(shí)例：大鼠附睪特異表達(dá)基因binlb和bin2a的克隆及其表達(dá)調(diào)控研究

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1、論文實(shí)例：大鼠附睪特異表達(dá)基因Binlb和Bin2a的克隆及其表達(dá)調(diào)控研究簡(jiǎn)介：李鵬，男，1971年12月出生，1996年09月師從于中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院張永蓮教授，于2001年08月獲博士學(xué)位。摘要附睪是精子成熟、貯存和受到保護(hù)的場(chǎng)所。在睪丸中完成形態(tài)分化的精子細(xì)胞進(jìn)入附睪，在通過(guò)附睪的過(guò)程中，獲得了前向運(yùn)動(dòng)能力和受精能力。這些能力的獲得，是精子表面與附睪區(qū)域性表達(dá)的基因在管腔中造成的微環(huán)境不斷相互作用的結(jié)果。另外，各種性傳播疾病、男性不育一直是威脅人類生殖健康的、全球性問(wèn)題。人口危機(jī)也對(duì)安全避孕，尤其是男性避孕也提出

2、了新的要求。因此，對(duì)男性生殖機(jī)理的研究受到越來(lái)越多的重視。近來(lái)，我們實(shí)驗(yàn)室在大鼠附睪頭部先后克隆了兩個(gè)基因。其中，Bin1b的全長(zhǎng)cDNA為385，編碼一個(gè)68個(gè)氨基酸的多肽。它是一個(gè)單拷貝基因，有一個(gè)大小約為1.3kb的內(nèi)含子。在18種不同的組織中，Bin1b只在大鼠附睪頭部有表達(dá)，表達(dá)的組織專一性很高。并且它只表達(dá)在附睪頭部中段的上皮細(xì)胞中。另外，Bin1b在大鼠發(fā)育到性成熟時(shí)，表達(dá)水平最高，并在整個(gè)性成熟期維持較高的表達(dá)水平。同源性分析表明，它很有可能是哺乳動(dòng)物體內(nèi)的一種先天性免疫效應(yīng)分子b-defein家族中的一員，在靈

3、長(zhǎng)類中也有同源分子存在。與香港中文大學(xué)合作，利用附睪上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及反義核酸技術(shù)證明了它的抗菌性。同時(shí)，Bin1b的表達(dá)可以被附睪炎癥上調(diào)。Bin2a的全長(zhǎng)cDNA為2606,編碼637個(gè)氨基酸。Bin2a的氨基酸序列中包括Glycosylhydrolasesfamily35家族中的9段相對(duì)保守的序列,其中包括210位的活性中心Glu（protondonor）,但是缺少另外一個(gè)活性中心，279位的Glu（nucleophile）。并且，Bin2a與大鼠附睪中報(bào)道的酸性b-半乳糖苷酶顯然不同。所以，Bin2a可能是b-半乳糖苷

4、酶家族的新成員。Bin2a表達(dá)受雄激素上調(diào)，其表達(dá)的組織專一性也很高，只在大鼠附睪有表達(dá)，并主要在附睪頭部。與Bin1b不同的是，Bin2amRNA的水平在45天時(shí)，有一個(gè)表達(dá)高峰。Bin1b和Bin2a的克隆，為研究附睪中的粘膜免疫過(guò)程以及精子成熟提供了線索。關(guān)鍵詞：附睪，精子成熟，男性避孕，b-defein，b-半乳糖苷酶AtractEpididymisisreoibleforermmaturation,storageandprotection.ermatozoathatemergefromthetesteshadtotra

5、versetheepididymistoacquiremotilityandfertility.Theacquisitionresultsfromtheinteractionbetandtheoptimalmicroenvironmentcreatedbygenesaltubule.Additionally,sexuallytramitteddisease,maleinfertilityandmalecontraceptionremai.Somoreattentioarepaidontheresearchofmalereprod

6、uctivetract.Ourlabhaveclonedtisrecently.Thefull-lengthcDNAofBin1bis385,encoding68aminoacid.Itisasingle-copygeneandhasa1.3kbintron.Of18organtiues,Bin1bmRNAisandconfinedtoepithelialcellsinthemiddlepartofthecaputregion.Itentallyregulatedanditsexpreionstartedat30daysofag

7、eandreachedamaximumduringthesexuallyactiveperiod,andthen,decreasedintheagedrats.Bysimilarityanalysis,Bin1bisprobablyaneemberofmamalianb-defeinfamilymunity.Andithashomologsinprimate.Itsantimicrobialactivityaryculturesofepididymalepitheliaandantiseetechniqueunderthecoo

8、perationofTheChineseUniversityofHongKong.Thefull-lengthcDNAofBin2ais2606,encoding637aminoacid.Itsaminoacidsequencehasninecoervedblo