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1、腺病毒介導(dǎo)HSV論文【關(guān)鍵詞】神經(jīng)膠質(zhì)瘤【Abstract】AIM:ToobservekillingactionofHSVtk/GCVsystemongliomacells.METHODS:C6cellseasuringtheadenovirustransfectedefficiency.C6cellssurvivalandbystandereffectgL-1GCVtotransfectedcells.RESULTS:Themorethemultiplicityofinfection(MOI),themoretheadenovirustransfected
2、efficiencytoC6cells(r=0.819,P0.05).100%transfectedefficiencyneededMOI100.ThekillingactionofHSVtk/GCVonC6cells,dependedontheamountofAdCMVtk(r=0.870,P0.05).ThereediatedHSVtk/GCVsystemhasgoodkillingeffectongliomaC6cells.【Keya【摘要】目的：觀察腺病毒介導(dǎo)的單純皰疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶/丙氧鳥甘(herpessimplexvirusthymidi
3、nekinase/ganciclovirHSVtk/GCV)系統(tǒng)對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷作用.方法：將AdCMVLacZ感染膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6，Xgal染色，測(cè)定腺病毒的轉(zhuǎn)染率.AdCMVtk感染C6細(xì)胞后加入10mgL-1GCV，觀察腫瘤細(xì)胞存活率及旁觀者效應(yīng).結(jié)果：tk基因?qū)6細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率隨著腺病毒的感染復(fù)數(shù)（MOI）量增加而增加(r=0.819,P0.05)，100%轉(zhuǎn)染所需要的MOI為100.AdCMVtk/GCV對(duì)C6細(xì)胞的殺傷強(qiáng)度與AdCMVtk的量成正相關(guān)(r=0.870,P0.05).此殺傷作用存在旁觀者效應(yīng)，且較強(qiáng).結(jié)論：腺病毒介導(dǎo)的HSVtk/
4、GCV系統(tǒng)具有殺傷腦膠質(zhì)瘤的作用.【關(guān)鍵詞】tk基因；腺病毒；神經(jīng)膠質(zhì)瘤0引言HSVtk基因是一種自殺基因，其產(chǎn)物將無毒的核苷類似物轉(zhuǎn)變成有毒物質(zhì)，干擾腫瘤細(xì)胞DNA合成.freela公司產(chǎn)品.293細(xì)胞、C6細(xì)胞由本室保存，均在含100mLL-1新生牛血清（Gibco公司產(chǎn)品）、100mgL-1青霉素、100mgL-1鏈霉素的RPMI1640（Gibco公司產(chǎn)品）培養(yǎng)基中培養(yǎng).1.2方法AdCMVLacZ，AdCMVtk在293細(xì)胞中擴(kuò)增，氯化銫密度梯度離心法純化，以含100mLL-1甘油的透析液透析，并用噬斑分析法測(cè)定腺病毒滴度.C6細(xì)胞按2×105/孔
5、接種于6孔板，用感染復(fù)數(shù)（MOI）為1，10，50，100和200的AdCMVLacZ感染48h后用0.5gL-1戊二醛固定，Xgal（終濃度1gL-1）染色.光鏡下觀察，藍(lán)色細(xì)胞說明有LacZ基因表達(dá)，即已被腺病毒轉(zhuǎn)染.計(jì)藍(lán)色細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分率，即腺病毒的轉(zhuǎn)染率.實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取其平均值.C6細(xì)胞按5×103/孔接種于96孔板，24h后用不同MOI的AdCMVtk（1，10，50，100和200）感染，3h后加入10mgL-1GCV，對(duì)照組加PBS，每組設(shè)3復(fù)孔.5d后每孔加入5gL-1MTT10μL，4h后吸掉上清，加入50μL二甲基亞砜，振蕩混勻后
6、，用酶標(biāo)儀測(cè)定A值.細(xì)胞存活率按公式（A實(shí)驗(yàn)組/A對(duì)照組）×100%計(jì)算.未轉(zhuǎn)染的C6細(xì)胞與轉(zhuǎn)染的C6細(xì)胞以不同比列混合，接種于96孔板（5×103/孔），轉(zhuǎn)染的C6細(xì)胞占的百分率分別為10%，20%，30%，40%，50%和60%.24h后加入10mgL-1GCV，第5日計(jì)算每孔細(xì)胞的存活率.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理.2結(jié)果2.1重組腺病毒對(duì)C6細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率AdCMVLacZ和AdCMVtk的滴度均為2×1012PFUL-1.腺病毒對(duì)C6細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率與腺病毒量有關(guān).隨著MOI的增加，腺病毒對(duì)C6細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率增加，兩者呈正相關(guān)(r
7、=0.819,P0.05)，當(dāng)MOI為1，10，50，100和200時(shí)有6%，19%，82%，100%和100%的C6細(xì)胞可被AdCMVLacZ轉(zhuǎn)染(Fig1).2.2AdCMVtk/GCV系統(tǒng)對(duì)C6細(xì)胞的殺傷作用經(jīng)不同MOI（1~200）的AdCMVtk感染C6細(xì)胞后給予GCV，計(jì)算細(xì)胞的存活率，實(shí)驗(yàn)組隨著MOI的增加，C6細(xì)胞存活率減少兩者呈正相關(guān)(r=0.870,P0.05).MOI為1，10，50和100時(shí)細(xì)胞存活率為91%，56%，38%和6%，MOI為200時(shí)幾乎無細(xì)胞存活（Fig1）.而對(duì)照組單獨(dú)使用AdCMVtk（MOI100）對(duì)細(xì)胞無殺傷作
8、用.■：Transfectionefficiency
