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1、高效液相色譜法測(cè)定雷公藤片含量的方法研究論文.freel。結(jié)果雷公藤甲素線性范圍為0.0476～0.4760μg，r=0.9991，平均回收率為101.2%，RSD為2.1%（n=6）。結(jié)論雷公藤片含量測(cè)定限度暫定為：每片含雷公藤以雷公藤甲素（C37H22O14）計(jì).freelg/片?！娟P(guān)鍵詞】雷公藤片雷公藤甲素高效液相色譜雷公藤片為衛(wèi)矛科木質(zhì)藤本植物雷公藤Tripterygiumm×4.6mm，5μm）；雷公藤甲素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)0857-9601）；甲醇為色譜純，水為重蒸水；其他試劑為分析純；雷公藤片由湖北三九黃石藥業(yè)有限公司提供。2
2、方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為大連依利特HypersilC18液相色譜柱（200mm×4.6mm，5μm）；甲醇-水（40∶60）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)218nm；流速1ml/min；柱溫：35℃；理論板數(shù)按雷公藤甲素峰計(jì)不低于3000。2.2供試液制備方法和洗脫液用量的選擇2.2.1供試液制備方法的選擇雷公藤制劑中成分較為復(fù)雜，不經(jīng)提取精制難以得到較好的分離效果，參照常雪靈等［2］的文獻(xiàn)報(bào)道，進(jìn)行了提取精制方法的考察。精密稱取樣品粉末約1g，加醋酸乙酯20ml，超聲使溶解，加5%HCl溶液15ml洗滌兩次，棄去酸液，醋酸乙酯液加10%NaOH溶液20ml，水
3、浴加熱15min，分取堿液，并用10%NaOH溶液20ml萃取兩次，合并堿液，加稀HCl調(diào)pH至4，以醋酸乙酯20ml萃取3次，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定容?0ml作為供試品溶液。精密稱取樣品粉末約1g，加氯仿10ml，超聲10min，加中性氧化鋁1g，攪拌均勻，蒸干，上中性氧化鋁柱（內(nèi)徑12mm，100～200目，10g），以醋酸乙酯溶液洗脫，收集洗脫液150ml，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓ㄈ葜?0ml作為供試品溶液。精密稱取樣品粉末約1g，加氯仿10ml，超聲10min，加中性氧化鋁1g，攪拌均勻，蒸干，上中性氧化鋁柱（內(nèi)徑12mm，1
4、00～200目，10g），以10%醋酸乙酯石油醚（60～90℃）50ml洗脫，再以1%乙醇醋酸乙酯溶液洗脫，收集洗脫液100ml，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定容?0ml作為供試品溶液。取上述3種溶液按擬定的色譜條件分別進(jìn)樣。結(jié)果見表1。表13種提取分離方法測(cè)定結(jié)果（略）結(jié)果表明：采用上中性氧化鋁柱提取分離效果較萃取法好，方法3中用10%醋酸乙酯石油醚（60～90℃）50ml洗脫主要是除去雜質(zhì)，但經(jīng)比較此法對(duì)分離影響不大，而以1%乙醇醋酸乙酯溶液洗脫對(duì)測(cè)定結(jié)果無多大影響，但洗下較多雜質(zhì)，基線波動(dòng)較大，雜質(zhì)峰較多，對(duì)分離造成一定影響，故采用方法2作為含量測(cè)定方法
5、。2.2.2溶劑用量的選擇精密稱取樣品粉末約1g，共3份，分別加氯仿10ml，超聲10min，加中性氧化鋁1g，攪拌均勻，蒸干，上中性氧化鋁柱（內(nèi)徑12mm，100～200目，10g），以醋酸乙酯溶液洗脫，分別收集洗脫液100，150，200ml，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定容?0ml作為供試品溶液。將3種溶液按擬定的色譜條件分別進(jìn)樣。結(jié)果見表2。表23種溶劑用量測(cè)定結(jié)果（略）結(jié)果表明，以醋酸乙酯溶液洗脫，收集洗脫液150ml較合適。2.2.3流動(dòng)相的選擇以乙腈-水（30∶70）作為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果雷公藤甲素出峰較快，樣品溶液難以得到較好分離，改用（15
6、∶85），（20∶80），（25∶75）等雷公藤甲素均不出峰，最后選用甲醇-水（40∶60）為流動(dòng)相，雷公藤甲素出峰時(shí)間約為11min，樣品溶液分離較好，無雜質(zhì)峰干擾。2.3含量測(cè)定2.3.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取雷公藤甲素對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含0.01mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。2.3.2供試品溶液的制備取本品30片，稱定重量，研碎，精密稱取10片量，加氯仿10ml，超聲10min，加中性氧化鋁1g，攪拌均勻，蒸干，上中性氧化鋁柱（內(nèi)徑12mm，100～200目，10g），以醋酸乙酯溶液洗脫，收集洗脫液150ml，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定容?
7、0ml作為供試品溶液。2.3.3線性關(guān)系考察精密稱取雷公藤甲素對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含0.0238mg的溶液作為對(duì)照品貯備液。精密吸取對(duì)照品貯備液1，2，4，6，8，10ml，分別置10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣20μl，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，雷公藤甲素對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程：Y=2110.8X+3.7，r=0.9991，結(jié)果表明雷公藤甲素對(duì)照品在0.0476～0.4760μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.3.4精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液20μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定雷公藤甲素的吸收峰面
8、積，RSD為1.84%，表明精密度良好。2.3.5穩(wěn)
