xx物流開題報(bào)告畢業(yè)論文

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1、XX物流幵題報(bào)告畢業(yè)論文研究背景眼科最常見致盲眼病有白內(nèi)障、青光眼、糖尿病視網(wǎng)膜病變和黃斑病等，其中青光眼是繼白內(nèi)障后的第二致盲原因，我國青光眼的發(fā)病率為％，患病人數(shù)約為700萬。XX年資料顯示世界青光眼發(fā)病人數(shù)到XX年將達(dá)到7000萬，雙眼盲目人數(shù)達(dá)到840萬(quigleyetal.，xx)。眾多的青光眼患者和青光眼盲者，不僅給患者帶來極大的身心痛苦，而且還造成社會(huì)和經(jīng)濟(jì)的巨大負(fù)擔(dān)，因此，預(yù)防、控制及治療青光眼十分重要且迫切!青光眼是一種由于病理性眼壓增高導(dǎo)致的具有特征性視神經(jīng)結(jié)構(gòu)損傷和視野缺損為表現(xiàn)的神經(jīng)性退行性視神經(jīng)病變，其最終的結(jié)局是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(rgcs)凋亡、視功能逐漸

2、喪失(btickinghametaL,xx)。目前己有大量保護(hù)rgcs的研宄結(jié)果，主要包括：改善視乳頭微循環(huán)、谷氨酸途徑抑制劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子，誘導(dǎo)熱休克蛋白表達(dá)及抗氧化治療等。然而，青光眼的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、受體通道研究在rgcs損傷與保護(hù)中的作用近年來正得到關(guān)注。最新的研究方向和靶點(diǎn)之一是關(guān)于能感受壓力的受體通道可能參與傳遞病理刺激造成神經(jīng)損傷(quigleyetal.,xx)。trpc6(transientreceptorpotential,c6)是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的、壓力敏感、參與神經(jīng)元存活與凋亡的鈣離子通透膜通道蛋白。本人曾參與課題"trpc6通道在視網(wǎng)膜缺血再灌模型

3、中對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)的保護(hù)作用"的研究，并獲得了有價(jià)值的前期研究結(jié)果：較為全面而精確的定位了trpc6通道基因和蛋白在sd大鼠視網(wǎng)膜、尤其是rgcs上的表達(dá)和分布，trpc6在rgc層上有選擇性的高表達(dá);探討了trpc6在大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌(ischemiareperfusion,ir)損傷過程中的表達(dá)變化，trpc6基因和蛋白在視網(wǎng)膜缺血損傷中的再灌注后24小時(shí)，出現(xiàn)一過性的表達(dá)升高;在體的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，其激動(dòng)劑oag具有保護(hù)視網(wǎng)膜ir模型誘導(dǎo)的rgcs免受損傷，而拮抗劑skf96365則促進(jìn)了rgcs凋亡的發(fā)生，本研究擬進(jìn)一步探討trpc6的作用機(jī)制。研宄發(fā)現(xiàn)，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(

4、brain-derivedneurotrophicfactor，bdnf)與trpc通道在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)控細(xì)胞存活的過程中有密切的聯(lián)系。xx年4月中國科學(xué)院上海神經(jīng)科學(xué)研究所王以政研宄員課題組在natureneuroscience上發(fā)表論文，首次證實(shí)過表達(dá)trpc6/trpc3可保護(hù)小腦神經(jīng)元對(duì)抗因血清剝奪而導(dǎo)致的細(xì)胞死亡，且發(fā)現(xiàn)bdnf位于trpc3/6介導(dǎo)的細(xì)胞保護(hù)信號(hào)通路的上游(taietal.,xxa;jiaeta1.，xx)。本課題擬探討bdnf介導(dǎo)trpc6通道蛋白保護(hù)視網(wǎng)膜跟模型誘導(dǎo)的rgcs免受損傷的作用機(jī)制，對(duì)深入闡明青光眼的發(fā)病機(jī)制，為臨床干預(yù)治提供新的思路和藥物干預(yù)靶

5、點(diǎn)，具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。本課題的研究主要分為以下二部分：第一部分視網(wǎng)膜ir模型中調(diào)控trpc通道時(shí)bdnf的表達(dá)變化一、研究目的在sd大鼠視網(wǎng)膜ir模型中檢測(cè)bdnf基因不同再灌注時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化，同時(shí)檢測(cè)抑制trpc通道時(shí)bdnf蛋白水平變化、探討其表達(dá)類型對(duì)rgcs凋亡的影響。二、研究方法：1、在視網(wǎng)膜ir模型中檢測(cè)bdnf基因的表達(dá)。采用視神經(jīng)血管鉗夾法建立視網(wǎng)膜ir模型，夾閉視網(wǎng)膜血供60分鐘，分別于再灌注后3小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、7天處死大鼠，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提取視網(wǎng)膜總rna,利用反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(rt_pcr)及實(shí)時(shí)焚光定量pcr(real-timepc

6、r)測(cè)定bdnf基因表達(dá)變化。2、抑制trpc通道時(shí)檢測(cè)bdnf蛋白的表達(dá)。建立大鼠視網(wǎng)膜ir模型，于視網(wǎng)膜缺血術(shù)前30分鐘，右眼通過玻璃體腔注射trpc拮抗劑skf96365為實(shí)驗(yàn)組，左眼注射溶劑Pbs為陰性對(duì)照組，分別于再灌后3小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)處死大鼠，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提取視網(wǎng)膜總蛋白，蛋白質(zhì)免疫印跡(westernblot)檢測(cè)bdnf在視網(wǎng)膜組織中的蛋白表達(dá)水平。3、抑制trpc通道時(shí)檢測(cè)bdnf基因的表達(dá)。將sd大鼠分為4組，分別進(jìn)行如下處理：第一組，對(duì)眼球進(jìn)行假手術(shù)，只行視神經(jīng)分離術(shù)，不行視網(wǎng)膜缺血手術(shù);第二組，建立視網(wǎng)膜ir

7、模型;第三組于視網(wǎng)膜缺血術(shù)前30分鐘，通過玻璃體腔注射pbs溶液，然后再建立視網(wǎng)膜ir模型;第四組于視網(wǎng)膜缺血術(shù)前30分鐘，通過玻璃體腔注射注射skf96365,然后再建立視網(wǎng)膜ir模型。所有大鼠于再灌注后24小時(shí)處死，摘取眼球，顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，提取視網(wǎng)膜總rna，real-timepcr測(cè)定bdnf基因表達(dá)變化。三、研究結(jié)果rt-pcr及real-timepcr結(jié)果顯示bdnfmrna在再灌注后3小時(shí)開始出現(xiàn)升高，24小時(shí)出現(xiàn)