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1、RECK在人喉鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義【摘要】目的通過檢測80例人喉鱗癌組織中RECK的表達(dá)情況，討探RECK在喉鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法用免疫組化法、蛋白印跡分析(edicalUniversity3.DepartmentofHeadandNeckSurgery,LiaoningCancerHospital,Shenyang110000China)Abstract:ObjectiveTodiscussthepotentialroleofRECKinLaryngealsquamouscellc
2、arcinoma(LSCC)bytestingtheexpressionofRECKinhumanLSCC,atotalof80LSCCpatients.Methods(1)RECKexpressioninsurgicallyresectedtissuesamplesoflaryngealcarcinomas(n=80)inedimmunohistochemically;(2)TheexpressionsofRECKerasechainreactions(RT-PCR).ResultsThepo
3、sitiveRECKstainedinthehornypearlandglandulartubecells,butnotinthecarcinomalcells.ConclusionsRECKgenecan?tbeconsideredasakeypointinthepathogenesisofLSCC. Keyouscellcarcinoma(LSCC);RECKgene 喉癌是頭頸部第二位原發(fā)于上皮的最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率僅次于鼻咽癌。在過去40年里對喉癌的發(fā)病機理的研究已取得許多進(jìn)步，
4、但喉癌發(fā)生的確切機理、侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機制還不十分清楚。RECK(reversion-inducing-cysteine-richproteinotifs)基因是近年來發(fā)現(xiàn)的新型基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑[1]，目前研究認(rèn)為作為一種獨立的膜錨合基質(zhì)金屬蛋白酶調(diào)節(jié)因子，RECK基因在多種正常組織中均高表達(dá)，而在腫瘤組織中表達(dá)量明顯下降甚至不表達(dá)，且RECK基因表達(dá)下降的幅度與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力成明顯正相關(guān)。因此，RECK基因是目前研究較為廣泛的一種抑癌基因?！ ?材料與方法 1.1臨床資料 喉癌組織8
5、0例,來源于2005年5月至2007年10月遼寧省腫瘤醫(yī)院行喉癌手術(shù)的切除標(biāo)本,患者年齡42～81歲,平均60.5歲,均保存有完整的臨床和病理資料:I期24例，II期12例，III期22例，IV期17例。每1例石蠟切片皆包括癌組織和其癌旁的正常黏膜組織?！ ?.2免疫組化染色 山羊抗人多克隆抗體RECK(1∶50倍稀釋)購自SantaCruzBiotech，免疫組化SP試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。所有組織均經(jīng)甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，免疫組化SP法染色參照試劑說明書進(jìn)行，RECK采用高溫
6、高壓法修復(fù)抗原。用已知的陽性切片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。(責(zé)任編輯：編輯04) 1.3argin-top:0px;margin-right:0px;margin-bottom:10px;margin-left:0px;padding-top:0px;padding-right:0px;padding-bottom:0px;padding-left:0px;line-height:24px;color:rgb(0,0,0);"> 應(yīng)用RIPA裂解液裂解組織,應(yīng)用分光光度計測定總蛋
7、白濃度SDS-PAGE凝膠電泳(90V,2h),電轉(zhuǎn)儀電轉(zhuǎn),(300mA,1.5h,4℃)。將硝酸纖維素膜與適當(dāng)稀釋的第一抗體(1∶200)室溫下反應(yīng)2h,再與用雜交液按比例(1：8000)稀釋的二抗雜交2h,ECL反應(yīng)顯色。 1.4RT-PCR法檢測組織中RECK基因的mRNA表達(dá) Trizol一步法抽提組織中的總RNA,引物設(shè)計見 在本研究中按照不同解剖分區(qū)、病理分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移將80例喉癌手術(shù)標(biāo)本分類進(jìn)行研究。通過免疫組化染色發(fā)現(xiàn)RECK蛋白表達(dá)僅存在于粘膜固有層中的混合腺體
8、的腺上皮細(xì)胞和少數(shù)高分化鱗癌的角化珠及其周圍細(xì)胞中，而在中分化癌巢及大部分癌巢的非角化細(xì)胞中及正常喉組織中未發(fā)現(xiàn)RECK蛋白陽性表達(dá)。在不同解剖分區(qū)、不同病理分化程度及是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的喉癌組織中RECK蛋白均呈陰性表達(dá)。這與TakenakaK[5]1620、李晟磊[9]、姚金光[10]的研究結(jié)果不一致?！ akenakaK等研究了171例非小細(xì)胞肺癌，RECK蛋白表達(dá)陽性率為89.5%,其中有鱗癌63例。本文與TakenakaK等的研究不一致的原因考慮為絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管粘膜上皮，故
